背景簡(jiǎn)介

CD8+T細(xì)胞屬于在其表面表達(dá)CD8的T細(xì)胞亞群之一，也被稱為細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic Tlymphocyte，CTL)，通過與抗原提呈細(xì)胞相互作用后活化增殖并發(fā)揮其殺傷功能。

作為T淋巴細(xì)胞的主要組分之一，CD8+T細(xì)胞可通過與靶細(xì)胞直接接觸，并通過分泌顆粒酶和穿孔素殺傷腫瘤細(xì)胞，同時(shí)CD8+T細(xì)胞也可以釋放細(xì)胞因子如IFN-γ和TNF-α等，從而進(jìn)一步調(diào)節(jié)宿主的免疫反應(yīng)。

基本信息

細(xì)胞名稱：小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞

分離方法：磁珠分選

組織來源：C57小鼠脾臟

細(xì)胞形態(tài)：圓形、淋巴母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)

小鼠CD8+T細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形，細(xì)胞可激活傳代。

小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞特點(diǎn)

1.細(xì)胞殺傷

通過CD8+T細(xì)胞的受體識(shí)別靶細(xì)胞并特異性結(jié)合，然后釋放顆粒酶，穿孔素等，破壞靶細(xì)胞，直接殺傷靶細(xì)胞;

2.產(chǎn)生細(xì)胞因子

CD8+T細(xì)胞也可產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，除了IFN- γ和TNF-α外，CD8+T細(xì)胞還可以分泌多種白細(xì)胞介素如IL-4、IL-5、IL-9等調(diào)節(jié)宿主的免疫反應(yīng);

3.具有多個(gè)亞型

CD8+T細(xì)胞也可細(xì)分為多個(gè)亞型包括Tc1、Tc2、Tc9、Tc17和Tc22，在機(jī)體中發(fā)揮不同功能;

4.免疫記憶功能

當(dāng)機(jī)體受到病原體的二次侵入時(shí)，記憶CD8+T細(xì)胞能夠介導(dǎo)更加快速、強(qiáng)烈、有效的免疫應(yīng)答。

小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞提取分離實(shí)驗(yàn)步驟

材料準(zhǔn)備

工具：4-6周C57小鼠、小鼠CD8+T細(xì)胞分選試劑盒 、紅細(xì)胞裂解液、眼科鑷、眼科剪、細(xì)胞篩網(wǎng)、PBS緩沖液、小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞專用培養(yǎng)基。

提前開啟紫外線照射超凈臺(tái)30min：將培養(yǎng)基和添加劑室溫融化，使用前室溫中預(yù)溫10-30 min。HBSS緩沖液緩沖液預(yù)冷，紫外照射完畢后，75%酒精消毒超凈臺(tái)，超凈臺(tái)通風(fēng)10 min以上。

培養(yǎng)瓶：準(zhǔn)備25cm2的培養(yǎng)瓶。

操作步驟

1.處死小鼠，無菌取出脾臟，使用PBS清洗干凈脾臟，在70 μm 細(xì)胞篩網(wǎng)上研磨脾臟，以預(yù)冷的PBS沖洗細(xì)胞篩網(wǎng)，收集細(xì)胞懸液于 50 mL 離心管中，500 g，離心5 min。

2.離心結(jié)束，棄上清，加入5 mL紅細(xì)胞裂解液(ACK)，室溫裂解5 min，再加入20 mL PBS，500 g， 離心5 min。

3.將脾細(xì)胞重懸于PBS，細(xì)胞懸液用70 μm 細(xì)胞篩網(wǎng)過濾后，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度為1×108 cells/mL。

4.按照每100 μL 細(xì)胞懸液(1×107個(gè)細(xì)胞)對(duì)應(yīng)2 μL Biotin-Antibody Mix加入無菌流式管底部，混勻后 4°C 孵育10 min。

5.孵育完成后，在流式管中加入 20 μL streptavidin磁珠(1×107個(gè)細(xì)胞)(使用前渦旋振蕩重懸磁珠，確保磁珠完全重懸)，混勻后4°C 孵育10 min。

6. 孵育完成后，在流式管中加入2.5 mL分選buffer，用移液器上下混合吹打5次混勻(避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻)。

7.將含有細(xì)胞的流式管置于磁力架上，靜置5 min。將細(xì)胞懸液輕柔倒入一個(gè)無菌離心管中(傾倒過程中流式管不要脫離磁力架)，此細(xì)胞懸液中即包含 純化的小鼠CD8+T細(xì)胞，500 g，離心5 min。離心后棄上清，收集細(xì)胞， 將細(xì)胞重懸于培養(yǎng)基中，即可用于后續(xù)擴(kuò)增。

小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞流式鑒定

CD8是CD8+T細(xì)胞重要的標(biāo)記物,也是識(shí)別CD8+T細(xì)胞最可靠的標(biāo)志。

小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞研究應(yīng)用

研究

CD8+T細(xì)胞是人體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，?通過識(shí)別和攻擊被感染的細(xì)胞或異常細(xì)胞，?其功能的發(fā)揮主要通過與靶細(xì)胞接觸殺傷靶細(xì)胞，在宿主腫瘤免疫以及抵御病原微生物侵害方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。??

實(shí)驗(yàn)研究：通過分離培養(yǎng)CD8+T細(xì)胞可更便于在體外觀察CD8+T細(xì)胞與多種免疫細(xì)胞共同協(xié)作引發(fā)宿主正常細(xì)胞和癌細(xì)胞損傷的機(jī)制，從而通過藥物干預(yù)的方法激活或抑制CD8+T細(xì)胞活力從而達(dá)到治療患者的目的。

應(yīng)用

TIL(?腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞)?療法

從患者體內(nèi)提取腫瘤組織中的CD8+T細(xì)胞，?并在實(shí)驗(yàn)室中擴(kuò)增和改造，?使其能夠更有效地識(shí)別和攻擊癌細(xì)胞，使該方法具有高效并且更加安全的特點(diǎn)。

TCR(?T細(xì)胞受體)?療法

通過提取患者的CD8+T細(xì)胞，?并在其中加入一個(gè)可以表達(dá)T細(xì)胞受體的基因，?使T細(xì)胞產(chǎn)生特異性的T細(xì)胞受體，?從而能夠追蹤并殺死癌細(xì)胞，目前TCR療法在殺傷黑色素瘤以及治療肝癌方面展現(xiàn)出極佳的治療效果。?

CAR-T(?嵌合體抗原受體T細(xì)胞)?療法

從患者血液中提取T細(xì)胞，?通過基因改造加入一種制造嵌合體抗原受體的CAR基因，?使改造后的T細(xì)胞能夠特異性地追蹤并殺死癌細(xì)胞，目前在CAR-T?療法使用最多的T細(xì)胞即為CD8+T細(xì)胞，并在腫瘤患者治療方面效果顯著。