細胞污染是細胞培養(yǎng)中最常見、最棘手的問題，在發(fā)現細胞形態(tài)異常時，一定要及時排查污染并進行處理，否則會給我們的實驗造成極大的影響。細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種，分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染。

常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法

常見細胞污染類型

1. 真菌污染

污染來源：一般是來自實驗服，并且具有氣候性，多雨、氣候濕潤的季節(jié)容易出現。

污染培養(yǎng)細胞的真菌種類很多，常見的主要有：曲霉菌、黑曲霉、毛霉、白色念球菌、孢子菌、酵母菌等。

污染特征：真菌形態(tài)各異，但污染后均不難發(fā)現，真菌污染一般肉眼可見，肉眼下可觀察到培養(yǎng)液中有淡黃色或是白色的點狀漂浮物，短期內培養(yǎng)基一般不變混濁。倒置顯微鏡下可見細胞之間有絮狀交錯的菌絲或菌團，在高倍鏡下可以看見鏈狀排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形，散在細胞上及細胞周邊生長。細胞被污染后仍可生長，長時間細胞的活力狀態(tài)會變差。

呈鏈球狀或絲狀。常形成肉眼可見的菌落，培養(yǎng)基顏色無變化或變紫，僅對局部細胞影響較大，其他地方生長正常。會形成孢子，容易污染其他細胞。

1.2處理方法

真菌污染可以嘗試使用兩性霉素B進行處理，抑制真菌生長，在PBS潤洗、換液后可加入兩性霉素B(注意兩性霉素B有細胞毒性，使用后可能會有副作用)，也可加入300μg/mL氟康唑培養(yǎng)，污染控制后改用150μg/mL培養(yǎng)2~3代。但真菌污染一般難以根除，若非必要，建議消殺后丟棄，對細胞房、培養(yǎng)箱、操作臺以及器皿和培養(yǎng)液等進行全面消毒。

真菌污染可以嘗試使用兩性霉素B進行處理，抑制真菌生長。

1.3真菌預防

真菌污染屬于微生物污染，預防主要從空氣、器材、操作、血清入手。

a.減少空氣流動，培養(yǎng)室和操作室要注意空氣的消毒，工作時要戴口罩。

b.細胞培養(yǎng)器材消毒要徹底，盡可能的做到定期消毒，大概一周一次，若培養(yǎng)液漏出，則應立即消毒。

c. 實驗操作應有無菌觀念，動作要符合規(guī)范，不使用污染的器具，瓶蓋應封緊。

d. 血清生產和使用時可能受到污染，在使用前最好先檢查血清是否被污染，使用過程中也要保證不被污染。

2. 細菌污染

污染來源：操作不規(guī)范或無菌措施不到位等。

常見菌種：常見的細菌污染有大腸埃希菌、白色葡萄球菌、假單胞菌等。細菌污染后，培養(yǎng)液在短期內會變黃色，因為有大量酸性物質產生，而且會發(fā)生渾濁。

污染特征：顯微鏡下可觀察到大小不一(0.5～5μm)的物質，比細胞小很多，低倍鏡下呈沙粒狀布滿細胞間隙或培養(yǎng)基，高倍鏡下多呈球狀或桿狀，形態(tài)規(guī)則，分布均勻，鏡下觀察有明顯的定向運動；增殖速度快，一般污染后48~72h爆發(fā)式增殖；營養(yǎng)消耗快，培養(yǎng)基pH發(fā)生變化，顏色很快變黃，變渾濁，甚至可能有明顯的異味；細胞生長緩慢，形態(tài)發(fā)生改變甚至脫落死亡。

2.1處理方法

輕度污染或細胞比較珍貴：可用10～20×雙抗清洗處理。吸出培養(yǎng)基，以PBS清洗2～3遍，加胰酶消化至細胞形態(tài)略有變化但未脫離容器底部，加PBS輕輕潤洗1次后加入20×高濃度雙抗浸泡細胞3～5min，棄雙抗；加入含10×雙抗的無污染完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)12h后正常傳代，并仍以含10×雙抗的完培進行培養(yǎng)，若第二代鏡下未觀察到細菌，第三代則可用正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，傳代48h后無反彈認為污染已清除。

重度污染建議直接消殺丟棄后對培養(yǎng)箱進行徹底消毒。為預防細菌感染，建議日常培養(yǎng)基中正常添加雙抗。

細菌污染后大多能改變培養(yǎng)液 pH 培養(yǎng)液變混濁，毒性大的細菌很快導致細胞崩解死亡。加用抗生素的培養(yǎng)用液一般可預防和排除個別少量細菌的污染。細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。

處理方法：輕度污染可用10X雙抗清洗處理，重度污染建議消殺后丟棄

3. 支原體污染

支原體污染：支原體(Mycoplasma)是一種沒有細胞壁的原核生物，大小約 0.3 - 0.8 微米。目前，已發(fā)現的支原體品種有 100 多種。 由于支原體直徑較小，經?？梢源┻^實驗室常規(guī)的 0.20 微米孔徑的除菌濾膜，高壓過濾時，甚至可以穿過 0.10 微米孔徑的除菌濾膜，造成細胞的支原體污染。在細胞培養(yǎng)過程中，支原體感染發(fā)生率達到 63%，因而細胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。當細胞(特別是傳代細胞)被支原體污染后，細胞內的 DNA、RNA 及蛋白表達發(fā)生改變，而細胞的生長率一般并未發(fā)生顯著的影響，因而細胞被支原體污染一般難以察覺。

污染來源：血清、胰酶、已污染物的氣溶膠、操作人員的口腔及皮膚等。

常見種類：口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體等。直徑約為 0.1～0.3 μm，具有變形能力，可通過過濾膜(0.22-0.45 μm)。

污染特征：最小的微生物，無法通過光學顯微鏡看見，但可通過電鏡觀察到。感染支原體的細胞，在某一時間點碎片突然增多，隨著傳代，細胞狀態(tài)顯著變差。細胞增殖減慢，鏡下觀察碎點變多、細胞邊界變得模糊、形態(tài)異常(拉絲、鋪展)、胞漿出現小顆?；蚩张荩瑺顟B(tài)越來越差；培養(yǎng)條件未變，培養(yǎng)基清澈；更換新的培養(yǎng)液，細胞狀態(tài)沒有恢復。支原體污染可通過氣溶膠傳播，影響同一細胞房其他細胞。

3.1支原體鑒定方法

鑒定方法：分離培養(yǎng)法、PCR法、ELISA、DNA熒光染色法、電鏡等。

支原體是一類缺乏細胞壁的細胞，呈高度多形性，細胞培養(yǎng)中被支原體污染是比較常見的問題，因為污染來源太多，包括工作環(huán)境、操作者、血清、實驗器材等，鑒定的方法如下。

a. 相差顯微鏡觀察。其中可以采用直接觀察或地衣紅染色觀察，直接觀察時，位于細胞表面和細胞之間的暗色微小顆粒為支原體，但要與線粒體區(qū)分。

b. 熒光染色法。將細胞接種于蓋玻片上，在細胞未長滿前取出玻片，用不含酚紅的Hank's液漂洗后，再用1:3醋酸甲醇固定10min，然后用生理鹽水漂洗，置于用生理鹽水配制的 Hoechst 33258(濃度為50ul/ml)中染色10min，熒光染料將支原體內的DNA著色，染色后用蒸餾水洗1~2min，滴加pH5.5磷酸緩沖液數滴，然后置熒光顯微鏡下觀察。鏡下散于細胞周圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點為支原體。

c. 電鏡檢查。制備電鏡標本，用掃描電鏡或透射電鏡觀察。

d. DNA分子雜交檢查。按試劑盒說明進行，檢出率高，但方法較復雜。

e. PCR?，F有支原體PCR檢測試劑盒銷售，可按說明書檢測支原體污染。

3.2處理建議

支原體污染十分麻煩，若細胞已受支原體污染，最佳的處理方式是將細胞高壓滅菌后丟棄，以免污染其它潔凈的細胞株，培養(yǎng)箱的其他細胞可用支原體抑制培養(yǎng)基培養(yǎng)1～2代，以作預防，并使用支原體環(huán)境消毒試劑進行環(huán)境消毒。

對于珍稀細胞

1)采用支原體抑制試劑處理細胞，根據相關指南使用，周期結束后可以進行鑒定。

2)清洗純化法，由于支原體個體小且除發(fā)酵支原體外多為細胞外寄生，所以通過反復洗滌細胞和低速離心換液使?jié)撛谥гw數量降低至極限，并結合敏感抗生素的抑殺作用，可達到較好的效果，但極有可能無法根除;

3)支原體特異性血清：用5%的兔支原體免疫血清可抑制支原體生長，一般抗血清處理后11天即可轉為陰性。

4)巨噬細胞吞噬法：將巨噬細胞與被支原體污染細胞共培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，為檢查支原體是否已被消除干凈，可利用支持物培養(yǎng)法驗證，取出支持物逐日染色、鏡檢觀察，至支原體被消除干凈為止。

5)使用支原體抗體培養(yǎng)基，每2~3天更換1次新鮮培養(yǎng)液，換液時用無菌PBS洗滌細胞1~2次，保持適當細胞密度;處理15天后，用支原體檢測試劑盒檢測支原體是否完全清除;

6)為避免細胞再次受到支原體污染，應每隔1月進行支原體的常規(guī)檢測，以保證沒有新的支原體污染。

處理方法：若細胞狀態(tài)尚可，添加支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉陰；若細胞狀態(tài)很差，建議消殺后丟棄。

4. 黑膠蟲污染

污染來源：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現類似現象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。

“黑膠蟲”是一種常見的細胞污染物，暫無明確定義，可存在于動物細胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，隨細胞傳代而傳代，是一種異養(yǎng)物質，主要來源為血清。

4.1污染特征

培養(yǎng)液不渾濁，但在顯微鏡下觀察細胞時，細胞周圍和培養(yǎng)液中有很多“小黑點”，且“黑膠蟲”與細胞數量呈負相關，隨著細培養(yǎng)時間的延長“小黑點”逐漸增多，更換培養(yǎng)液或洗滌細胞不能將其去除;?

細胞營養(yǎng)消耗快，需要頻繁更換培養(yǎng)液;

細胞生長緩慢，細胞狀態(tài)差，空泡化嚴重，甚至還可能出現細胞形態(tài)的改變。

“黑膠蟲”與細胞競爭性生長，嚴重時導致細胞死亡。

4.2處理方式

對于黑膠蟲污染的細胞，最快速有效的處理方式是使用黑膠蟲清除劑，添加黑膠蟲抑制劑/支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉陰，同時確保培養(yǎng)體系中的血清必須為無黑膠蟲污染的優(yōu)質血清。非珍稀或污染嚴重細胞建議直接丟棄。

另外對培養(yǎng)箱做由里至外的清潔處理;

4.3預防措施

實驗進行前，超凈臺用紫外燈照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超凈臺臺面，并開啟超凈臺風機運轉5-10min再開始實驗操作；

實驗用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺內;實驗用品用完應移出超凈臺，以利于空氣的流通;實驗完成后用75%酒精擦拭超凈臺臺面；

每次操作只處理一種細胞，即使不同細胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基，避免細胞間的交叉污染；

操作時小心取用無菌的物品，避免污染。勿碰觸吸管尖頭，不小心碰觸后應立即更換;不要在打開的容器瓶口正上方操作，容器打開后，傾斜45°操作，操作完成后及時蓋上瓶蓋；

CO2培養(yǎng)箱的清潔是較易被忽視的地方，應1-2個月對培養(yǎng)箱定期進行清潔消毒。

先用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱內壁、隔板、水盤2-3次，用雙蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，最后紫外燈照射4h以上。水盤內加入無菌水(應每周更換)，待培養(yǎng)箱內溫度、濕度、CO2濃度穩(wěn)定后再放入細胞；

定期清洗或更換超凈臺過濾膜、預濾網。

5.細胞交叉污染

特征：即不同的細胞混雜在一起

污染來源：細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開，往往會出現細胞交叉污染。目前，已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染，致使許多實驗宣告無效。

鑒定方式：同種屬進行STR鑒定，多等位基因數大于3個。(需考慮本身的遺傳背景，如EA.hy 926為融合細胞，本身就包含兩套遺傳信息)；不同種屬進行PCR法，對種屬特異性基因進行擴增，不同種屬產物大小不同。

處理建議：建議重新引種。

預防建議：盡量避免多細胞同時操作，如傳代等;器具和培養(yǎng)溶液避免交叉使用。

污染防治策略

NO.1 細胞房環(huán)境控制

環(huán)境要求：潔凈區(qū)10000級，局部100級，定期進行沉降菌檢測

環(huán)境消毒：每周一次定期消毒滅菌

a.地面/墻面：84消毒液、新潔爾滅交叉使用

b.環(huán)境消毒：定期紫外照射，臭氧熏蒸

c.儀器設備表面：75%酒精擦拭，培養(yǎng)箱、顯微鏡托盤等高風險區(qū)域需經常清潔，培養(yǎng)箱水盤和復蘇用的水浴鍋需添加抑菌劑

d.耗材消毒：需重復使用的耗材確保按照規(guī)定清洗、高溫高壓滅菌，使用滅菌指示帶。滅菌后烘干的耗材立刻放進超凈臺，一周內使用完畢，未使用完的，需重新滅菌再使用

NO.2 實驗人員管理

著裝：著連體衣，戴口罩、手套，頭發(fā)、手腕等要包好，減少皮膚外露。

行為：減少走動，出入關門，操作時不要講話。

技能:養(yǎng)成良好的無菌操作習慣。

其他：減少共用物品，公共使用區(qū)域統一使用習慣，區(qū)分潔凈區(qū)域和有風險的區(qū)域。

細胞房規(guī)范操作流程

1)進入細胞房前穿戴實驗服、口罩、手套及鞋套等，用消毒酒精擦拭雙手;

2)實驗前準備：提前0.5～1h打開超凈臺紫外燈進行消毒，同時將足量所需試劑、耗材等放置于消毒窗口，打開紫外燈進行消毒。

3)按照個人習慣擺放試劑、耗材及儀器，切勿置于生物安全柜進出風口;

4)操作要準確、敏捷、有序，盡量減少試劑和細胞瓶的敞口時間;專管專用，避免交叉污染;

5)操作完成后，將試劑放回原位;丟棄廢物和廢液;用酒精擦拭臺面進行消毒;打開超凈臺及細胞房紫外燈，至少照射15min進行消毒。

6)定期清理建議

NO.3 實驗用品管理

試劑：使用前確保無菌，自己配制的試劑需過濾除菌后再使用。

耗材：需要重復使用的耗材確保按照規(guī)定清洗、高溫高壓滅菌，使用滅菌指示帶。滅菌后烘干的耗材立刻放進超凈臺，一周內使用完畢，未使用完的，需重新滅菌再使用。

儀器設備：定期擦拭消毒，培養(yǎng)箱、顯微鏡托盤等高風險區(qū)域需經常清潔，培養(yǎng)箱水盤和復蘇用的水浴鍋需添加抑菌劑。

其他：當出現培養(yǎng)物泄漏時，應及時清理干凈;出現局部污染時，應找出污染源并對環(huán)境整體消毒。

細胞污染類型常見問題

1.如何判斷小黑點是污染還是碎片

細胞碎片或者分泌物

在細胞代謝過程中，細胞凋亡后會產生一些分泌物的沉積和碎片物質，在顯微鏡下呈黑點狀。

特征

細胞碎片大小不均一，會隨著培養(yǎng)時間少量增多，但是不會呈倍增的趨勢增多;

細胞狀態(tài)差時碎片會較多，狀態(tài)變好后黑點減少;

細胞分泌物情況根據細胞有區(qū)別，有的細胞不產生分泌物，有的細胞會有較多的分泌物，往往是不影響細胞形態(tài)和增殖速度。

外源微生物污染

當細胞被支原體、黑膠蟲或者細菌污染時，往往也會產生很多小黑點，尤其是細菌污染的情況出現時，這些小黑點甚至會導致培養(yǎng)液渾濁。

如何區(qū)分是否為污染

外源微生物污染

支原體和黑膠蟲污染一般表現為黑點增多并伴隨細胞生長速度變慢、死細胞增多等現象，通常加入對應清除試劑后細胞狀態(tài)會有顯著改善。

細胞分泌物/細胞碎片

細胞分泌物和細胞碎片則不會因為加入清除試劑后而改善，會持續(xù)存在且不影響細胞增長。

細胞污染后的處置

細胞一旦發(fā)現有污染出現，應及時對所用試劑和耗材進行清理。耗材可更換新的或者重新高壓滅菌，試劑可重新過濾除菌或者更換新批次，操作臺和細胞房需用消毒液進行全面清潔消殺后方可復蘇新的細胞，以免反復出現污染。

2.在細胞培養(yǎng)液中，有種可以游動的蟲子是什么污染?

是細菌污染。帶鞭毛的細菌就是會游動的。

3.有很多黑點，在原位顫抖，沒那么明顯的定向運動，是什么污染?

細胞碎片、血清沉淀和有些細菌污染，都會在原位顫抖。前者是原地做不規(guī)律的布朗運動，細菌是原地轉動，頻率會高很多。

4.血清的絮狀物雜質屬于正常現象嗎?

血清里面有一些大分子蛋白和一些纖維析出，呈現絮狀，也有一些磷酸鈣析出呈現小黑點，這些都是很常見的。沉淀太多，可以離心去掉部分。血清沉淀的多少也跟血清的溶解方式有關，溶解過程中最好是4℃，期間不時搖晃進行溶解。根據普諾賽多年培養(yǎng)細胞經驗，血清的沉淀多與少并不決定血清質量。

5.液體變微黃、渾濁怎么解決?

這個是典型的細菌污染。如果細胞形態(tài)尚且完整，可以嘗試用10%的雙抗清洗去除，或者使用別的抗生素清除，如慶大霉素50U/mL、四環(huán)素10μg/mL等;如果細胞狀態(tài)已經很差，就沒有挽救的價值了。

6.為什么有的培養(yǎng)基天天需要換液呢?

正常情況下，是不需要每天換液的。培養(yǎng)基橘黃色是細胞比較喜歡的環(huán)境，正常是2~3天換一次比較好，換液多了細胞狀態(tài)反而容易受影響。如果是因為培養(yǎng)基異常消耗，才需要每天換液，那么我們要做的是找到異常消耗的原因，是細胞量過多，還是有其他細菌或者支原體污染。先找到原因才能不用每天換液。

7.凍存的細胞，每次復蘇養(yǎng)幾天就污染了，是什么原因呢?

如果凍存前就帶進去了污染，那么同一批次的復蘇出來都會有污染。這種情況下，可以在復蘇當天給予抗生素清除(不能用雙抗)，如慶大霉素50U/mL、四環(huán)素10μg/mL等;如果同一批有復蘇沒有污染的情況，要考慮復蘇過程，建議換一下水浴鍋的水和其他試劑耗材再復蘇。

8.細胞培養(yǎng)不生長，傳代擴不起來，是不是就是支原體污染?

支原體污染肉眼是很難區(qū)分的，支原體污染會導致細胞狀態(tài)變差，但是細胞狀態(tài)變差并不是都是支原體造成的，所以我們還是要用支原體檢測加以區(qū)分。

9.培養(yǎng)基污染以后，可以過濾一下繼續(xù)使用嗎?

不建議繼續(xù)使用。培養(yǎng)基里面可能會有殘留的細菌分泌物，比如內毒素等，可能會影響細胞生長。

10.培養(yǎng)箱水盤用什么抑菌劑?

傳統方法用硫酸銅，但是硫酸銅屬于重金屬，還是有一定的毒性的。建議使用水浴鍋安全衛(wèi)士，安全無毒，可以持續(xù)一周無菌狀態(tài)。

11.試劑已經全部換新的了，還是一直污染，是什么原因?

如果試劑盒耗材全部更換了，還需要排除下凍存前是否有污染。再就是是否存在操作問題，可考慮換其他人養(yǎng)一下試試。

12.懸浮細胞碎片形成的黃團怎么處理呢?

懸浮細胞碎片形成的黃團可以通過低速離心去除，前提是細胞量一定要夠多，轉速一般可以降低到800rpm左右。離心完上清別急著丟，先看下細胞是否已經離心下來，也可以根據細胞大小調節(jié)離心轉速。

13.細胞里面有一些小方塊一樣的東西，是什么原因?

小方塊一般是結晶類的。可以先用培養(yǎng)基或者PBS稀釋溶解后換液，看有沒有改善。

14.放了五個月的完全培養(yǎng)基，出現絮狀懸浮物，但是觀察不是細菌，可以過濾后加點血清繼續(xù)使用嗎?

不建議繼續(xù)使用。絮狀物首先要排除霉菌類的污染；即使排除了霉菌，完培產生絮狀物析出了，也會對成分有一定的影響，影響后期培養(yǎng)細胞。

15.飼養(yǎng)雜交瘤細胞，如果觀察有沒有污染，大概要在多大倍鏡下觀看?

觀察污染的話400倍鏡就夠了，10X目鏡加40X物鏡。

16.請問貼壁細胞表面有白膜，培養(yǎng)液惡臭，是什么原因導致的污染?

有白膜和惡臭應該是有污染無疑了，還很嚴重，具體是細菌還是真菌，要結合顯微鏡下的菌體形態(tài)來進一步區(qū)分。

17.細胞污染后，用10倍雙抗處理后，沒有再長，這時細胞可以凍存嗎?

細菌不再生長，恢復正常1%抗生素后一周內沒有再長起來，就是清除干凈了，可以凍存。

18.孵箱中一瓶細胞有黑膠蟲污染，慢慢地整個孵箱都有污染了，那孵箱怎么打掃?

把細胞全部轉移走，再用消毒液把培養(yǎng)箱全部擦拭一遍；培養(yǎng)箱水一定要清理干凈；培養(yǎng)箱角落和表面都噴上細胞房衛(wèi)士，關閉培養(yǎng)箱保持30分鐘，再打開散氣30分鐘，換上干凈的無菌水就行了。

19.請問培養(yǎng)箱滅菌水多久換一次呢?換的時候每次都要90℃滅菌么?

水浴鍋的滅菌水不加抑菌劑的話，建議是每次復蘇前都更換新的；加了水浴鍋安全衛(wèi)士，可以一周換一次，水是121℃滅菌20分鐘。

20.液氮有沒有可能污染?

理論上液氮這種極端的環(huán)境里，是不會有生物存活的，細菌凍存也是需要保護劑的。

21.新復蘇的細胞，一天后正常貼壁，但是培養(yǎng)液里懸浮大量的黑色團塊，是什么原因呢?

可能是有細菌污染了，還是要結合顯微鏡下的黑團形態(tài)來進一步確診。

為了防止發(fā)生污染，預防是第一位的，而且要注意實驗規(guī)范，盡量做到定期消毒，實驗人員也要有防止污染發(fā)生的意識，遇到發(fā)生污染情況可運用上述的鑒定和去除方法，不過一切的去除方法都不如一個眾所周知的習慣——保存無污染的細胞株，這才是最明智的做法。

規(guī)范操作是避免污染的最有效方式。細胞培養(yǎng)間配備槍式移液器、手術器械、離心機、冰箱等專用儀器設備以及專用的實驗服和拖鞋，并定期消毒。專用物品只在培養(yǎng)間內使用，不得帶出細胞房。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞。必要物品可暫時放置，其他實驗用品用完即應移出，以利于氣流的通暢。培養(yǎng)細胞過程中使用的所有實驗用具，如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等需121°C高壓滅菌20分鐘后烤干備用，一些玻璃器皿如細胞培養(yǎng)瓶等須先泡酸、洗凈、晾干后再高壓滅菌。