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細胞半換液和全換液操作步驟

發(fā)布時間:2022-05-10 09:01:42 細胞資源庫平臺 訪問量:430

細胞換液是指去除舊的培養(yǎng)基,換成新的完全培養(yǎng)基以繼續(xù)提供細胞充足的營養(yǎng)支持。當舊培養(yǎng)基 ph 值改變(含酚紅的培養(yǎng)基通常是變酸發(fā)黃)時,需要及時進行換液。在培養(yǎng)細胞的過程中,換液是一項非常常規(guī)操作,它主要是為了清除細胞在生長過程中產(chǎn)生的各種代謝廢物,補充新鮮的培養(yǎng)基,促進細胞生長。細胞換液主要有全換液和半換液兩種方式,那么,不同方式的換液方法如何更換細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的溶液呢?

換液前工作準備

環(huán)境準備:相對密封、防塵、防菌的無菌室

操作者準備:雙手清潔呈可操作狀態(tài)

物品準備:超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、裝有75%醫(yī)用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、含血清培養(yǎng)基、巴氏吸管、移液器、廢液缸。

工作準備:預熱完全培養(yǎng)基,酒精棉擦拭培養(yǎng)基瓶外表面后移入生物安全柜/超凈工作臺。

細胞培養(yǎng)箱中取出的細胞,酒精棉擦拭培養(yǎng)瓶/皿外表面,移入生物安全柜/超凈工作臺。可以稍等待,待生物安全柜中的循環(huán)風將試劑瓶和培養(yǎng)瓶的外表面吹拂幾分鐘后,擰開培養(yǎng)基瓶蓋虛掩,擰開培養(yǎng)瓶瓶蓋虛掩,培養(yǎng)皿蓋不用擰。

細胞半換液和全換液操作步驟

第一種方式:細胞全換液

如果是貼壁細胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補充足量新鮮完全培養(yǎng)基。

細胞全換液具體步驟

1.將器材放入超凈臺,打開紫外照射滅菌,若是培養(yǎng)的細胞對溫度比較敏感,可以將含血清的培養(yǎng)基瓶放入37℃的水浴箱使得培養(yǎng)基溫度在37℃,再轉(zhuǎn)移到超凈臺紫外滅菌。另外,細胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時左右。

2.從培養(yǎng)箱取出細胞培養(yǎng)瓶,用酒精噴壺在瓶子表面噴灑75%酒精消毒,轉(zhuǎn)移到超凈臺,打開蓋子,輕輕吸出舊的培養(yǎng)液,可用移液器加入新鮮含血清培養(yǎng)基,注意一定不要從細胞貼壁面加入培養(yǎng)基,應從側(cè)壁加,動作輕柔,以免沖落細胞。

3.加好培養(yǎng)基后,蓋上蓋子,在瓶子上做標記,注明換液時間,細胞種類,操作人員等信息。

4.放入培養(yǎng)箱之前應再次用酒精噴一噴瓶子表面,然后應記得整理操作臺,用酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。

第二種方式:細胞半換液

“細胞半換液”又稱“細胞半量換液”,即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進去。選它的原因其實與前面不加PBS的理由有點相近。

半換液原因

1.給細胞提供適應的緩沖環(huán)境;

2.細胞生長過程中可能會分泌某些生長因子,促進生長;

3.節(jié)省材料

4.方便操作:比如96孔板,換液很麻煩。所以常采用排槍進行半換液;

5.對于懸浮細胞的培養(yǎng),有時也會選用半換液減低細胞密度;

細胞半換液操作步驟

如果是懸浮細胞,可以用半量換液法。

1.即吸去一半舊培養(yǎng)基

2.補充新鮮完全培養(yǎng)基(會損失一半細胞)。

懸浮細胞如果不想損失細胞,那就需要將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到離心管中,離心去除舊培養(yǎng)基,再用新培養(yǎng)基重懸細胞沉淀。

細胞換液常見問題

1.細胞換液是否需要用PBS清洗?

我們知道,在“貼壁細胞傳代”中,培養(yǎng)基中的血清會抑制胰酶的活性,影響消化的效果,所以必須要PBS 的清洗。

但對于細胞換液,尚未查到有資料明確說明是否需要PBS清洗。

這里應該根據(jù)細胞的具體情況考慮

a.若細胞比較“嬌氣”或生長狀態(tài)不是特別好時,建議還是不要用PBS清洗。一方面,細胞貼壁的狀態(tài)可能不是很牢固,PBS的沖洗會破壞細胞的貼壁狀態(tài);另一方面,PBS可能會洗掉細胞分泌的一些生長因子,這同樣不利于細胞狀態(tài)的調(diào)整。如果一定要洗,可以緩慢清洗,減少對細胞的傷害

b.當細胞生長狀態(tài)不錯,或者顯微鏡下觀察細胞液中不是很干凈時,可以選擇用PBS清洗。一方面可以去除積累的代謝物;另一方面,也可將一些生長狀態(tài)不好或衰老的細胞洗脫下來,保持細胞活力。

細胞換液注意事項

1.在進行換液操作時,全程注意無菌,操作人員要穿好滅菌服,戴好滅菌手套和口罩,手接觸到細胞培養(yǎng)瓶瓶口時一定要小心,避免造成污染。

2.加培養(yǎng)液時,不可直接加到細胞貼壁的面上。

3.換液前記得觀察細胞的狀態(tài)及拍照記錄

不光細胞維持培養(yǎng)時需要進行細胞換液,一些實驗操作也需要進行細胞換液。當換液操作是實驗需要時,可能在添加新的培養(yǎng)基前需要 PBS 清洗細胞以去除舊培養(yǎng)基的影響, 新添加的培養(yǎng)基也可根據(jù)實驗需求進行特殊配制,不一定是完全培養(yǎng)基。


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