MC38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞背景簡介

MC38，小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞，又名MCA38。來源于長期暴露于致癌物DMH (1,2-二甲基肼二鹽酸鹽)而患有結(jié)腸腺癌的C57BL6小鼠結(jié)腸腫瘤組織，并可高水平表達(dá)人癌胚抗原(CEA )。結(jié)腸直腸癌(CRC)是全球癌癥死亡的第二大原因。而嚙齒動物結(jié)腸癌模型研究是新藥物臨床前評估的有效方法。

MC38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞形態(tài)特征

MC38細(xì)胞形態(tài)為貼壁細(xì)胞，上皮細(xì)胞樣，具有良好的致瘤性，皮下MC38腫瘤的體內(nèi)倍增時間約為4天，其生長速率適中，可提供受試藥物長達(dá)三周的給藥窗口，以激發(fā)其抗腫瘤活性。

MC38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱：MC38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱：MCA-38; MCA 38; MCA38; MC38; Mouse Colon 38; Murine Carcinoma-38; Colon 38; Colon-38; Colon38; C38

種屬來源：雌性；C57BL/6小鼠，結(jié)腸

特性特征：貼壁生長，上皮細(xì)胞樣

STR位點(diǎn)信息：Mouse STR 4-2：20.3;Mouse STR 5-5：16,17：Mouse STR 6-4：18;Mouse STR 6-7：15,16;Mouse STR 12-1：17;Mouse STR 15-3：22.3,23.3;Mouse STR 18-3：15,16;Mouse STR X-1：27

保藏機(jī)構(gòu)：Kerafast;Ubigene;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心

培養(yǎng)基：DMEM+10% FBS+PS+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1%谷氨酰胺+1%HEPES

培養(yǎng)條件氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

mc38細(xì)胞培養(yǎng)步驟

細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件

實驗室條件

1. 無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2. 儀器設(shè)備：超凈工作臺-操作平臺、CO2 培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級水

3. 器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍(lán)色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：高糖DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，F(xiàn)BS，PS，NEAA，丙酮酸鈉，谷氨酰胺，1%HEPES，胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1. 無菌操作：洗手，戴手套，穿實驗服，常噴 75%酒精

mc38細(xì)胞復(fù)蘇方法

1.準(zhǔn)備：紫外線照臺 30min，提前打開水浴鍋設(shè)置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘(或者放在超凈工作臺常溫放 30min)。在操作臺上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機(jī)，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達(dá)到 37℃時，戴上手套和護(hù)目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時不斷輕輕搖動凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細(xì)胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機(jī)中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 6cm 培養(yǎng)皿中，(若離心后細(xì)胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 10cm 培養(yǎng)皿中)，標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細(xì)胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細(xì)胞。

5)確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動)，第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

mc38細(xì)胞傳代方法

1.從培養(yǎng)箱拿出mc38細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到 85%左右的時候即可進(jìn)行傳代;

2.打開廢液泵，用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個藍(lán)色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm 皿)到細(xì)胞培養(yǎng)皿中(若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS)，輕輕晃動以清洗細(xì)胞表面1-2次;

3.用廢液泵吸走 PBS 廢液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動以便胰酶浸泡到每個細(xì)胞，消化 1-3min(根據(jù)細(xì)胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時間長一點(diǎn)或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

4.用 1ml 移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對mc38細(xì)胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)?xì)胞也有傷害)，把培養(yǎng)瓶中所有細(xì)胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。

5.將裝有細(xì)胞懸液的離心管放入離心機(jī)中(配平)，1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min，用廢液泵取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細(xì)胞。

6.確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動)。第二天再觀察細(xì)胞密度。

mc38細(xì)胞凍存方法

從培養(yǎng)箱拿出細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細(xì)胞密度達(dá) 80–90%時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作，以T25 瓶為例

a.收集mc38 cell及細(xì)胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

b.根據(jù)mc-38細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液， 在細(xì)胞凍存管上貼上細(xì)胞標(biāo)簽(細(xì)胞標(biāo)簽上包含：細(xì)胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基)。

c.將凍存管入庫到-80 度凍存盒里，放置 24 小時后，即可移入液氮中保存，標(biāo)記好入庫位置和凍存日期。

mc38細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

mc38細(xì)胞收到貨脫落怎么處理?

mc38細(xì)胞本身貼壁不牢，運(yùn)輸脫落或者回縮都是正?，F(xiàn)象。收到細(xì)胞后請先置于培養(yǎng)箱中穩(wěn)定4h后再進(jìn)行下一步處理，不建議放置培養(yǎng)箱過夜后處理。

如果mc38細(xì)胞密度大于80%，正常傳代就可以，脫落的細(xì)胞也要收集.

mc38細(xì)胞來源于什么小鼠

mc38細(xì)胞來源于雌性的C57BL/6小鼠。

mc38細(xì)胞消化時間

mc38細(xì)胞消化時間1-2分鐘，不同胰酶消化時間不同，以實際消化時間為準(zhǔn)。

mc38細(xì)胞和ct26的區(qū)別

CT26 細(xì)胞系模型是一種常用于癌癥研究的小鼠同源移植結(jié)直腸癌模型。CT26細(xì)胞系最早由Balb/c小鼠的結(jié)腸腺癌組織中分離出來，將其接種于Balb/c小鼠構(gòu)建而成的移植瘤模型被廣泛用于腫瘤生物學(xué)、藥物治療以及免疫治療研究等領(lǐng)域。

MC38 細(xì)胞系模型是一種用MC38細(xì)胞系在小鼠體內(nèi)進(jìn)行同源小鼠移植結(jié)腸癌模型。MC38細(xì)胞最早是由C57BL/6小鼠的結(jié)腸腺癌組織中分離獲得的，將其接種于C57BL/6小鼠構(gòu)建而成的移植瘤模型常用于研究腫瘤生物學(xué)和腫瘤的免疫治療等。

MC38細(xì)胞用什么培養(yǎng)基

MC38細(xì)胞用的培養(yǎng)基是：高糖DMEM+10% FBS+PS+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1%谷氨酰胺+1%HEPES。

MC38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞應(yīng)用

MC38細(xì)胞對免疫調(diào)節(jié)抗體具有良好的應(yīng)答特性，證實了腫瘤微環(huán)境可修飾免疫激活。因此，MC38被定位為功能強(qiáng)大的免疫腫瘤學(xué)模型，在藥物研發(fā)中具有重要的用途，常用于抗腫瘤藥物在體內(nèi)的免疫功能研究。

MC38 細(xì)胞是來自 C57BL/6 小鼠結(jié)腸腺癌細(xì)胞系，貼壁生長并具有成纖維細(xì)胞形態(tài)。將MC38 細(xì)胞植入C57BL/6 小鼠或免疫功能低下的小鼠后會形成腫瘤和轉(zhuǎn)移，多用作結(jié)直腸癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移方向研究，并成為腫瘤藥效驗證的常用途徑。

MC38細(xì)胞參考文獻(xiàn)

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