背景簡介

T淋巴細胞是來源于骨髓的多能干細胞，在骨髓中由其前體細胞產(chǎn)生，隨后遷移到胸腺內(nèi)，在胸腺激素的誘導(dǎo)下分化成熟，成為具有免疫活性的T細胞。

作為淋巴細胞的主要組分，T細胞具有多種生物學(xué)功能，如直接殺傷靶細胞，輔助或抑制B細胞產(chǎn)生抗體，是身體中抵御各種病原微生物感染、抑制腫瘤形成的“斗士”。

基本信息

細胞名稱：小鼠脾臟CD3+T淋巴細胞

分離方法：磁珠分選

組織來源：C57小鼠

細胞形態(tài)：圓形、淋巴母細胞樣

生長特性：懸浮生長

小鼠脾臟CD3+T淋巴細胞特點

1.細胞殺傷

與靶細胞特異性結(jié)合，通過釋放顆粒酶，穿孔素等，破壞靶細胞膜，直接殺傷靶細胞;

2.免疫應(yīng)答

通過細胞表面的T細胞受體，識別抗原提呈細胞提呈的抗原，從而發(fā)揮免疫學(xué)功能;

3.調(diào)節(jié)B細胞分化

分泌細胞因子、蛋白質(zhì)或縮氨酸用來調(diào)控其它的免疫細胞;如白介素，可以使得B細胞分化成漿細胞;

4.免疫記憶功能

機體受到病原體的二次侵入時，記憶T細胞可更加迅速的再次破壞靶細胞即受病菌或病毒感染的細胞，釋放出靶細胞中的抗原

5.產(chǎn)生細胞因子

T淋巴細可產(chǎn)生多種細胞因子，如干擾素、轉(zhuǎn)移因子、白細胞介素等，這些淋巴因子，具有殺傷腫瘤細胞，刺激造血組織，對抗化療副作用等功能。

小鼠脾臟CD3+T淋巴原代細胞分離培養(yǎng)操作步驟

材料準(zhǔn)備

4-6周C57小鼠、BeaverBeads? 小鼠 CD3+T淋巴細胞分選試劑盒 、紅細胞裂解液、眼科鑷、眼科剪、細胞篩網(wǎng)、PBS緩沖液、小鼠脾臟CD3+T淋巴細胞專用培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基和緩沖液

將培養(yǎng)基和添加劑置于室溫，使用前室溫中預(yù)溫10-30 min。HBSS緩沖液緩沖液預(yù)冷，紫外照射完畢后，75%酒精消毒超凈臺，超凈臺通風(fēng)10 min以上。

培養(yǎng)瓶

準(zhǔn)備25cm2的培養(yǎng)瓶

小鼠脾臟CD3+T淋巴細胞操作步驟

1.將小鼠脫頸處死，在75%乙醇中浸泡5min，使用剪刀打開小鼠腹腔，取出小鼠脾臟，使用PBS沖洗兩遍。

2.在70μm細胞篩網(wǎng)上研磨脾臟，以預(yù)冷的PBS 沖洗細胞篩網(wǎng)，收集細胞懸液于 50 mL離心管中，500 g，離心5 min。

3.離心結(jié)束，棄上清，加入5 mL紅細胞裂解液(ACK)，室溫裂解5 min，再加入20 mL PBS，500 g， 離心5 min。

4.將脾細胞重懸于PBS，細胞懸液用70 μm 細胞篩網(wǎng)過濾后，計數(shù)，調(diào)整細胞密度為1×108 cells/ml。

5.按照每100 μL 細胞懸液(1×107個細胞)對應(yīng)2 μL Biotin-Antibody Mix加入無菌流式管底部，混勻后 4°C 孵育10 min。

6.孵育完成后，在流式管中加入 20 μL BeaverBeads? Streptavidin (1×107個細胞) (使用前渦旋振蕩重懸磁珠，確保磁珠完 全重懸)，混勻后4°C 孵育10 min。

7.孵育完成后，在流式管中加入2.5 mL 分選buffer，用移液器上下混合吹打5次混勻(避免劇烈振蕩或者 上下顛倒混勻)。

8.將含有細胞的流式管置于磁力架上，靜置5 min。將細胞懸液輕柔倒入一個無菌離心管中(傾倒過程中流式管不要脫離磁力架)，此細胞懸液中即包含 純化的小鼠CD3+T細胞，500 g，離心5 min。離心后棄上清，收集細胞， 將細胞重懸于培養(yǎng)基中，即可用于后續(xù)擴增。

磁珠陰選

小鼠脾臟CD3+T淋巴原代細胞流式鑒定

CD3是成熟T細胞的標(biāo)記物,是識別CD3+T細胞最可靠的標(biāo)志，此外，也可通過檢測TCR來識別CD3+T細胞。

小鼠脾臟CD3+T淋巴原代細胞培養(yǎng)注意事項

輕輕吹打T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基使細胞懸浮。

吸取培養(yǎng)瓶中所有培養(yǎng)基，在離心機中以1000轉(zhuǎn)離心5 min。

棄去上清，加入新的培養(yǎng)基重懸，于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

建議1：2傳代。

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~ 1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1 mL細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。

小鼠脾臟CD3+T淋巴原代細胞研究應(yīng)用

CD3+T細胞可代表成熟的T淋巴細胞在抗腫瘤治療中?T細胞是人體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，?通過識別和攻擊被感染的細胞或異常細胞，?在保護機體免受病原體和腫瘤侵害方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

實驗研究

通過分離T淋巴細胞可用于在體外研究T淋巴細胞引起炎癥反應(yīng)的機制，從而通過藥物等方法抑制T細胞活力緩解患者自身的免疫病理損傷。

TIL（腫瘤浸潤淋巴細胞）療法

?從患者體內(nèi)提取腫瘤組織中的T細胞，?并在實驗室中擴增和改造，?使其能夠更有效地識別和攻擊癌細胞。

TCR（T細胞受體）療法

?通過提取患者的T細胞，?并在其中加入一個可以表達T細胞受體的基因，?使T細胞產(chǎn)生特異性的T細胞受體，?從而能夠追蹤并殺死癌細胞。

CAR-T（嵌合體抗原受體T細胞）療法

?從患者血液中提取T細胞，?通過基因改造加入一種制造嵌合體抗原受體的基因，?使改造后的T細胞能夠特異性地追蹤并殺死癌細胞。