HPAC人胰腺癌細(xì)胞背景簡(jiǎn)介

HPAC是一種胰腺癌上皮細(xì)胞系，于1985年從一名患有導(dǎo)管起源的中分化至高分化胰腺癌的女性胰腺頭部切除的原發(fā)性腫瘤的裸鼠異種移植物中衍生出來(lái)。

HPAC人胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱：HPAC人胰腺癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱：HPAC；人胰腺癌細(xì)胞；人胰腺腺泡上皮癌

種屬來(lái)源：人，64歲

組織來(lái)源：胰腺

形態(tài)特性：貼壁生長(zhǎng)，上皮細(xì)胞樣

STR位點(diǎn)信息：Amelogenin：X;CSF1PO：13;D13S317：11;D16S539：9，10;D18S51：16;D19S433：14;D21S11：30;D2S1338：19，23;D3S1358：15，17;D5S818：12;D7S820：10，12;D8S1179：12，14;FGA：24;TH01：9.3;TPOX：10，11;vWA：15，17;

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; BCRC

培養(yǎng)基：DMEM/F12+5%FBS+0.002 mg/ml 胰島素+ 0.005 mg/ml 轉(zhuǎn)鐵蛋白+40 ng/ml 氫化可地松+10 ng/ml 表皮生長(zhǎng)因子

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

倍增時(shí)間：~23-44 hours

致瘤性：Yes, the cells form tumors in athymic nude mice at the site of inoculation which are histologically similar to the tumor of origin. Yes, the cells have a colony forming efficiency of 64% on plastic and 3.2% in agarose.

受體表達(dá)情況：epidermal growth factor (EGF), expressed; glucocorticoid, expressed; epidermal growth factor (EGF); glucocorticoid

基因表達(dá)情況：HPAC cells are positive for keratin and negative for vimentin and chromogranin A.

HPAC人胰腺癌細(xì)胞形態(tài)圖片

HPAC人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)操作說(shuō)明

細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件

實(shí)驗(yàn)室條件

1.無(wú)菌環(huán)境：無(wú)菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2.儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)-操作平臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級(jí)水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色0-10ul;黃色20-200ul;藍(lán)色100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm皿、10cm皿，培養(yǎng)瓶等。

4.試劑：雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs，DMEM/F12+5%FBS+0.002 mg/ml 胰島素+ 0.005 mg/ml 轉(zhuǎn)鐵蛋白+40 ng/ml 氫化可地松+10 ng/ml 表皮生長(zhǎng)因子

操作者工作范疇

1.無(wú)菌操作：洗手，戴手套，穿實(shí)驗(yàn)服，常噴75%酒精

HPAC人胰腺癌細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1)準(zhǔn)備：紫外線照臺(tái)30min，提前打開(kāi)水浴鍋設(shè)置37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20分鐘(或者放在超凈工作臺(tái)常溫放30min)。在操作臺(tái)上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL移液槍，3mL巴氏管。檢查離心機(jī)，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達(dá)到37℃時(shí)，戴上手套和護(hù)目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1mLHPAC細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時(shí)不斷輕輕搖動(dòng)凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細(xì)胞1min內(nèi)融化，加4mL培養(yǎng)基混合均勻，移入離心機(jī)中100rpm離心3min，以75%酒精噴凍存管外部，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。

3)用3mL巴氏管取5mL新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的6cm培養(yǎng)皿中，(若離心后細(xì)胞量較多，可取12mL新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的10cm培養(yǎng)皿中)，標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細(xì)胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取1mL新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將HPAC細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫(huà)“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫(huà)30個(gè)8字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

5)確定HPAC細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱過(guò)夜。(盡量平直放入不要晃動(dòng))，第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

HPAC人胰腺癌細(xì)胞傳代操作

從培養(yǎng)箱拿出HPAC細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)HPAC細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到85%左右的時(shí)候即可進(jìn)行傳代;

1.打開(kāi)廢液泵，用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個(gè)藍(lán)色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取4ml不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm皿)到細(xì)胞培養(yǎng)皿中(若是10cm皿則取8ml1xPBS)，輕輕晃動(dòng)以清洗細(xì)胞表面1-2次;

2.用廢液泵吸走PBS廢液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)以便胰酶浸泡到每個(gè)細(xì)胞，消化1-3min(根據(jù)細(xì)胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)或者放入CO2培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.用1ml移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個(gè)角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對(duì)細(xì)胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)?xì)胞也有傷害)，把培養(yǎng)瓶中所有細(xì)胞懸液用吸1ml移液槍移入無(wú)菌離心管中。

4.將裝有HPAC細(xì)胞懸液的離心管放入離心機(jī)中(配平)，1000轉(zhuǎn)離心3-5min，用廢液泵取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取1-2mL新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫(huà)“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫(huà)30個(gè)8字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

5.確定HPAC細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動(dòng))。第二天再觀察細(xì)胞密度。

HPAC人胰腺癌細(xì)胞凍存準(zhǔn)備

從培養(yǎng)箱拿出HPAC細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細(xì)胞密度達(dá)80–90%時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作，以T25瓶為例

細(xì)胞凍存步驟

a.收集HPAC細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，裝入無(wú)菌離心管中，1000rpm條件下離心4min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b.根據(jù)HPAC細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，在HPAC細(xì)胞凍存管上貼上細(xì)胞標(biāo)簽(細(xì)胞標(biāo)簽上包含：細(xì)胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的培養(yǎng)基)。

c.將凍存管入庫(kù)到-80度凍存盒里，放置24小時(shí)后，即可移入液氮中保存，標(biāo)記好入庫(kù)位置和凍存日期。

HPAC人胰腺腺泡上皮癌形態(tài)特征

1.細(xì)胞呈梭形或多邊形，細(xì)胞邊界清晰，細(xì)胞質(zhì)呈嗜酸性，細(xì)胞核位于細(xì)胞中央，染色質(zhì)呈顆粒狀。

2.細(xì)胞表面有許多微小的突起，這些突起可能是細(xì)胞與周圍細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)相互作用的結(jié)構(gòu)。

3.在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，HPAC細(xì)胞可形成互相連接的細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，這種結(jié)構(gòu)有助于細(xì)胞之間的物質(zhì)傳遞和信息交流。

HPAC人胰腺癌細(xì)胞的功能和應(yīng)用

HPAC 細(xì)胞在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:

1.作為肺組織干細(xì)胞的研究模型:HPAC細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖能力，可以用于研究肺組織干細(xì)胞的生物學(xué)特性和分化調(diào)控機(jī)制。

2.肺疾病治療:HPAC細(xì)胞可分化為肺泡上皮細(xì)胞、肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞等肺組織細(xì)胞，有望用于肺疾病的治療，如慢性阻塞性肺疾病、肺纖維化等。

3.肺組織工程:HPAC 細(xì)胞可用于制備生物材料，如組織工程肺、肺支架等，用于肺組織的修復(fù)和再生。

4.藥物篩選和毒性評(píng)價(jià):HPAC 細(xì)胞可用于藥物篩選和毒性評(píng)價(jià)，為藥物研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

HPAC細(xì)胞參考文獻(xiàn)

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