A549人非小細胞肺癌細胞簡介

A549細胞又稱為肺癌人類肺泡基底上皮細胞，最早是在1972年由D.J.Giard等人通過一位58歲的白人男性的外植體腫瘤，轉(zhuǎn)移并培養(yǎng)肺腫瘤組織而得到的。

在自然界中，這些細胞是鱗狀的，它們可以通過肺泡擴散傳播一些物質(zhì)，如水和電解質(zhì)。如果將A549細胞體外培養(yǎng)，它們會成長為單層細胞，附著或緊貼在培養(yǎng)瓶上。人肺泡上皮細胞株A549可以固定或懸掛在體外的溶液。這些細胞的另一個特點是他們能夠合成卵磷脂，并且含有高度不飽和的脂肪酸，這對于維持細胞膜磷脂有重要意義。

A549人非小細胞肺癌細胞形態(tài)特征

A549人非小細胞肺癌細胞產(chǎn)品信息

細胞名稱：A549人非小細胞肺癌細胞

細胞別稱：A 549; A549; NCI-A549; A549/ATCC; A549 ATCC; A549ATCC; hA549

種屬來源：人

年齡性別：58歲，白人男性

組織來源：肺

形態(tài)特性：貼壁生長，上皮細胞樣

STR位點信息：Amelogenin：X，Y;CSF1PO：10，12;D13S317：11;D16S539：11，12;D18S51：14，17;D19S433：13;D21S11：29;D2S1338：24;D3S1358：16;D5S818：11;D7S820：8，11;D8S1179：13，14;FGA：23;TH01：8，9.3;TPOX：8，11;vWA：14;

抗原表達情況：The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

保藏機構(gòu)：ATCC; CCL-185 ATCC; CRM-CCL-185 ATCC; CRL-7909 BCRC; 60074 BCRJ; 0033 DSMZ; ACC-107 ECACC; 86012804

培養(yǎng)基：90%高糖DMEM+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

倍增時間：~22 hours

抗原表達情況：The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

染色體：60~66，XY

A549人非小細胞肺癌細胞培養(yǎng)方法

細胞培養(yǎng)的基本條件

實驗室條件

1.無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2.儀器設(shè)備：超凈工作臺-操作平臺、CO2培養(yǎng)箱-細胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細胞、離心機-離心收集細胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細胞、純水儀-制備一級水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色0-10ul;黃色20-200ul;藍色100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm皿、10cm皿，培養(yǎng)瓶等。

4.試劑：DMEM高糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1.無菌操作：洗手，戴手套，穿實驗服，常噴75%酒精

A549人非小細胞肺癌細胞復(fù)蘇方法

1)準備：紫外線照臺30min，提前打開水浴鍋設(shè)置37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20分鐘(或者放在超凈工作臺常溫放30min)。在操作臺上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL移液槍，3mL巴氏管。檢查離心機，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達到37℃時，戴上手套和護目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1mLA549細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時不斷輕輕搖動凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細胞1min內(nèi)融化，加4mL培養(yǎng)基混合均勻，移入離心機中100rpm離心3min，以75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

3)用3mL巴氏管取5mL新鮮培養(yǎng)基到一個新的6cm培養(yǎng)皿中，(若離心后細胞量較多，可取12mL新鮮培養(yǎng)基到一個新的10cm培養(yǎng)皿中)，標記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取1mL新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后(充分混勻)，將A549細胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫30個8字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

5)確定A549細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動)，第二天換液并檢查細胞密度。

A-549人肺腺癌細胞培養(yǎng)注意事項

細胞顆粒感較重

細胞傳代培養(yǎng)時細胞內(nèi)黑點及細胞外顆粒較多，建議使用優(yōu)質(zhì)血清及培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞;

傳代、復(fù)蘇注意細胞狀態(tài)

細胞消化或者復(fù)蘇操作不當(dāng)容易導(dǎo)致細胞死亡裂解產(chǎn)生大量碎片及顆粒，進而影響活細胞狀態(tài)，注意消化或復(fù)蘇過程盡量輕柔，嚴格控制消化時間和復(fù)蘇操作規(guī)范，傳代或復(fù)蘇24h后建議觀察細胞，建議換液一次去除死亡細胞;

A549人非小細胞肺癌細胞傳代操作

1)從培養(yǎng)箱拿出A549 cell，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，當(dāng)A549細胞狀態(tài)良好，且密度達到85%左右的時候即可進行傳代;

2)打開廢液泵，用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個藍色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取4ml不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm皿)到細胞培養(yǎng)皿中(若是10cm皿則取8ml1xPBS)，輕輕晃動以清洗細胞表面1-2次;

3)用廢液泵吸走PBS廢液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動以便胰酶浸泡到每個細胞，消化1-3min(根據(jù)細胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時間長一點或者放入CO2培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后，在顯微鏡下觀察細胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細胞胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

4)用1ml移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對細胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)毎灿袀?，把培養(yǎng)瓶中所有細胞懸液用吸1ml移液槍移入無菌離心管中。

5)將裝有A549細胞懸液的離心管放入離心機中(配平)，1000轉(zhuǎn)離心3-5min，用廢液泵取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取1-2mL新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后(充分混勻)，將細胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫30個8字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

6)確定A549細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動)。第二天再觀察細胞密度。

A549人非小細胞肺癌細胞凍存方法

從培養(yǎng)箱拿出A549細胞，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，待細胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細胞密度達80–90%時，可進行細胞凍存操作，以T25瓶為例

細胞凍存步驟

a.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000rpm條件下離心4min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，在A549細胞凍存管上貼上細胞標簽(細胞標簽上包含：細胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的培養(yǎng)基)。

c.將凍存管入庫到-80度凍存盒里，放置24小時后，即可移入液氮中保存，標記好入庫位置和凍存日期。

a549細胞培養(yǎng)常見問題

a549可以用dmem高糖嗎?

a549細胞培養(yǎng)條件就是高糖的DMEM加上血清還有雙抗。

a549細胞一分二多久長滿

a549細胞長得挺快的，一分二的話，一般1-2天就可以長滿了。

a549細胞消化時間多久

A549細胞培養(yǎng)箱消化1-2分鐘即可。

a549是肺腺癌還是肺鱗癌

A549細胞是一種人類肺腺癌細胞系。

A549細胞形態(tài)特點

A549細胞是一種人類肺腺癌細胞系，廣泛應(yīng)用于肺腺癌的研究中。在細胞形態(tài)特點方面，A549細胞表現(xiàn)出以下幾個特點:

1.細胞形態(tài)

A549細胞呈橢圓形或卵圓形，大小約為15-30μm。細胞質(zhì)呈淡紫紅色，細胞核位于細胞中央，呈圓形或橢圓形，直徑約為10-15μm。細胞核染色質(zhì)均勻分布，核仁明顯。細胞質(zhì)內(nèi)含有豐富的細胞器，如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體等。

2.細胞表面特征

A549細胞表面呈現(xiàn)出微絨毛狀結(jié)構(gòu)，使細胞表面顯得粗糙。細胞表面還存在一些微細突起，使細胞具有一定的粘附性。這些突起結(jié)構(gòu)有助于細胞與周圍細胞或基質(zhì)進行黏附和相互作用。

3.細胞增殖特點

A549細胞具有較高的增殖能力，在培養(yǎng)基中可形成較為緊密的細胞群。細胞群中的細胞緊密排列，呈薄板狀或長條狀。細胞生長速度較快，通常在培養(yǎng)基中可見到細胞的分裂和增殖現(xiàn)象。

4.細胞遷移

A549細胞具有一定的遷移能力，在培養(yǎng)基中可形成細胞單層的移行現(xiàn)象。細胞從初始位置逐漸移動到周圍空白區(qū)域，形成新的細胞單層。細胞遷移速度較快，表現(xiàn)出較強的侵襲性。

多年來，A549細胞已經(jīng)得到了很好的表征，對于經(jīng)常將它們用作體外和體內(nèi)模型的研究人員來說很有價值。A549細胞是上皮細胞，在體外作為單層粘附生長，并作為合適的轉(zhuǎn)染宿主。這也意味著它們是排列在器官和組織表面的細胞。A549腺癌細胞在營養(yǎng)豐富的DMEM培養(yǎng)基中的實驗室中生長。當(dāng)它們以這種方式生長時，它們形成單層細胞。A549細胞成為肺癌研究模型的黃金標準，現(xiàn)在常用于細胞培養(yǎng)研究，作為研究人類肺癌的模型。

5.細胞凋亡

A549細胞在一定條件下可發(fā)生凋亡現(xiàn)象。凋亡細胞通常具有以下特點:細胞體積縮小，細胞核凝縮和碎裂，細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)凋亡小體等。凋亡細胞通常會被周圍細胞或者巨噬細胞吞噬，從而完成清除和消除的過程。

6.遺傳變異

A549細胞在長期培養(yǎng)過程中可能會發(fā)生一定程度的遺傳變異。研究表明，A549細胞具有多倍體性，染色體數(shù)目變異較大，存在著染色體缺失、重排和復(fù)制等遺傳變異。這些遺傳變異可能導(dǎo)致A549細胞系在不同實驗條件下表現(xiàn)出異質(zhì)性。

7.生物學(xué)行為

a.腫瘤特性：A549細胞具有腫瘤細胞的特性，包括快速增殖、無限增殖潛能和抗凋亡能力。這使得A549細胞成為研究肺癌生長、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程的理想模型。

b.腫瘤標志物：A549細胞表達多種腫瘤標志物，如細胞角蛋白、腫瘤相關(guān)抗原和轉(zhuǎn)錄因子等。這些標志物的表達特征可用于研究肺癌的診斷和治療靶點的篩選。

c.耐藥性：A549細胞對多種抗癌藥物具有一定程度的耐藥性。這使得A549細胞可用于研究肺癌耐藥機制以及開發(fā)新的抗癌藥物。

A549細胞應(yīng)用

1.肺癌發(fā)病機制研究：A549細胞可用于研究肺癌的發(fā)病機制，如細胞增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程。通過對A549細胞的相關(guān)基因和信號通路的研究，可以深入了解肺癌的發(fā)生和發(fā)展機制。

2.肺癌治療研究：A549細胞可用于評估抗腫瘤藥物的療效和毒副作用。通過體外細胞實驗和動物模型研究，可以篩選和評估新的抗癌藥物，并探索肺癌治療的新靶點和策略。

3.肺癌耐藥機制研究：通過研究A549細胞的耐藥性機制，可以揭示肺癌耐藥的分子機制，為克服耐藥性提供理論依據(jù)和新的治療策略。

人肺癌細胞A549具有許多特征，包括來源、形態(tài)學(xué)特征、遺傳變異和生物學(xué)行為等方面。它是肺癌研究中廣泛應(yīng)用的細胞系之一。通過研究A549細胞，可以深入了解肺癌的發(fā)病機制、評估抗癌藥物的療效和毒副作用，以及研究肺癌耐藥性的機制。A549細胞在肺癌研究和治療中具有重要的應(yīng)用價值，為肺癌的早期診斷、治療和預(yù)后評估提供了重要的實驗?zāi)Ｐ秃脱芯抗ぞ摺?/p>

A549人非小細胞肺癌細胞相關(guān)研究

有研究探討蝙蝠葛提取物對人肺癌細胞系A(chǔ)549誘導(dǎo)凋亡和抗增殖作用及其機制，為開發(fā)抗腫瘤新中藥提供實驗依據(jù)。方法應(yīng)用MTT法測定蝙蝠葛提取物對人肺癌細胞系A(chǔ)549的生長抑制作用;通過倒置顯微鏡、光學(xué)顯微鏡觀察腫瘤細胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化;采用流式細胞術(shù)檢測A549細胞的凋亡率;應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測藥物處理前后凋亡相關(guān)蛋白酶caspase-3、caspase-8、caspase-9的表達。結(jié)果(1)MTT法檢測結(jié)果：蝙蝠葛提取物對人肺癌細胞系A(chǔ)549有明顯的抑制生長的作用，且呈現(xiàn)出濃度的依賴性;(2)倒置顯微鏡觀察結(jié)果：實驗組腫瘤細胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)凝集，細胞間連接疏松，貼壁能力減弱;(3)HE染色觀察結(jié)果：實驗組腫瘤細胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)濃縮或染色質(zhì)塊形成，有的細胞膜起泡形成凋亡小體;(4)流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示：蝙蝠葛提取物可以誘導(dǎo)A549細胞發(fā)生凋亡，加藥組出現(xiàn)亞二倍體峰。結(jié)論(1)蝙蝠葛提取物在體外對人肺癌細胞系A(chǔ)549有顯著的誘導(dǎo)凋亡作用;(2)蝙蝠葛提取物誘導(dǎo)凋亡作用機制可能通過上調(diào)caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白表達，經(jīng)由細胞凋亡的死亡受體和線粒體通路完成凋亡的啟動和執(zhí)行;(3)蝙蝠葛提取物具有顯著的體外抗腫瘤作用，有望開發(fā)成一種新的抗腫瘤藥物。

此外，還有研究通過應(yīng)用RNAi技術(shù)沉默肺癌細胞系A(chǔ)549中的PEG10基因，探討PEG10在肺癌細胞系A(chǔ)549細胞增殖及侵襲遷移過程中的作用。方法RPMI-1640培養(yǎng)肺癌A549細胞。瞬時轉(zhuǎn)染及建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染shRNAPEG10細胞系;MTT及軟瓊脂克隆形成實驗檢測PEG10基因沉默對A549肺癌細胞增殖的影響;細胞劃痕試驗和Transwell小室方法觀察PEG10基因沉默對A549肺癌細胞遷移能力的影響;逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR、實時定量qRT-PCR及Westernblot檢測PEG10、β-catenin和其下游分子cmyc、MMPs、twist、E-cadherin、Vimentin表達水平的變化。結(jié)果PEG10干擾效率達65%;轉(zhuǎn)染后肺癌細胞劃痕愈合速度變慢;穿過Transwell小室的細胞數(shù)減少;克隆形成數(shù)目也降低，同時檢測到β-catenin及c-myc、MMPs、twist、Vimentin表達水平降低，E-cadherin表達水平升高。結(jié)論靶向封閉PEG10基因可下調(diào)Wnt/β-catenin信號通路的關(guān)鍵因子β-catenin的表達水平，降低肺癌A549細胞增殖、侵襲及遷移能力，部分逆轉(zhuǎn)肺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。

另外，還有研究探討全反式維甲酸(ATRA)對人肺腺癌細胞系A(chǔ)549細胞增殖及APLNR(apelinreceptor)基因表達的影響。方法采用四甲基偶氮唑藍(methylthiazolyltetrazolium，MTT)比色法檢測ATRA對體外培養(yǎng)的A549細胞增殖的抑制情況，光學(xué)顯微鏡下觀察細胞形態(tài)改變，流式細胞術(shù)檢測細胞周期及凋亡，westernblot檢測APLNR蛋白、cyclinD1及p16蛋白的表達情況。結(jié)果經(jīng)ATRA作用后，A549細胞增殖受到明顯抑制且抑制程度呈劑量及時間依賴性(P均<0.01);其細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，細胞周期被阻滯于G0/G1期且細胞凋亡率明顯升高(P<0.01);westernblot結(jié)果顯示，隨著ATRA濃度的升高，APLNR蛋白及cyclinD1蛋白的表達水平降低，而p16蛋白的表達水平升高(P均<0.01)。結(jié)論ATRA可抑制A549細胞增殖并促進其凋亡，且能下調(diào)APLNR基因的表達。

有研究探討Id1在人肺癌細胞系A(chǔ)549腫瘤細胞球中的表達情況，為肺癌干細胞的基因靶向治療提供理論依據(jù)。方法：應(yīng)用干細胞無血清培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)A549細胞腫瘤細胞球，采用克隆形成實驗檢測肺癌腫瘤球細胞增殖能力，流式細胞術(shù)檢測ABCG2在肺癌腫瘤球細胞中的表達情況，Westernblotting檢測Id1在肺癌腫瘤球細胞中的表達情況。結(jié)果：與貼壁細胞相比，人肺癌細胞系A(chǔ)549腫瘤細胞球細胞具有較強的克隆能力，且高表達ABCG2，符合肺癌干細胞的特點，Id1在人肺癌細胞系A(chǔ)549腫瘤細胞球細胞中高表達。結(jié)論：Id1可能成為靶向肺癌干細胞肺癌治療的靶點。

a549細胞參考文獻

[1] 蝙蝠葛提取物對人肺癌細胞系A(chǔ)549誘導(dǎo)凋亡作用的研究

[2] PEG10在人肺癌細胞系A(chǔ)549增殖及侵襲遷移過程中的作用

[3] 全反式維甲酸對人肺癌細胞系A(chǔ)549細胞增殖及APLNR基因表達的影響

[4] Id1在人肺癌細胞系A(chǔ)549腫瘤細胞球中的表達