SW756人子宮鱗狀癌細胞背景簡介

SW756細胞，1974年從一名46歲的白人女性鱗狀細胞癌患者的宮頸中分離出來。

SW756人子宮鱗狀癌細胞形態(tài)特征

SW756是一種具有上皮形態(tài)的細胞。

SW756人子宮鱗狀癌細胞產(chǎn)品信息

細胞名稱：SW756，人子宮鱗狀癌細胞

細胞別稱：SW756，SW-756，SW 756，人表皮角質(zhì)形成細胞

種屬來源：人

組織來源：子宮頸

生長特性：貼壁生長

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

培養(yǎng)基：L15+10%FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

染色體：75~80

STR位點信息：Amelogenin：X;CSF1PO：11,12;D3S1358：15,17;D5S818：11,12;D7S820：10,12;D8S1179：11,13;D13S317：11;D16S539：12,13;D18S51：14,17;D21S11：30;FGA：20,22;PentaD：9,12;Penta E：11,12;TH01：9.3;TPOX：8;vWA：17;

保藏機構(gòu)：ATCC

SW756人子宮鱗狀癌細胞培養(yǎng)操作說明

細胞培養(yǎng)的基本條件

實驗室條件

1. 無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風淋間，操作間

2. 儀器設(shè)備：超凈工作臺-操作平臺、CO2 培養(yǎng)箱-細胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細胞、離心機-離心收集細胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細胞、純水儀-制備一級水

3. 器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：L15培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1. 無菌操作：洗手，戴手套，穿實驗服，常噴 75%酒精

SW756細胞復(fù)蘇步驟

1.準備：紫外線照臺 30min，提前打開水浴鍋設(shè)置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘(或者放在超凈工作臺常溫放 30min)。在操作臺上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達到 37℃時，戴上手套和護目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mLSW756細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時不斷輕輕搖動凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 6cm 培養(yǎng)皿中，(若離心后細胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 10cm 培養(yǎng)皿中)，標記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后(充分混勻)，將SW756細胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

5)確定SW756細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動)，第二天換液并檢查細胞密度。

SW756細胞傳代操作

1) 準備工作：紫外線照臺 30min，準備好SW756細胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS(試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時以上);傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管(已滅菌)，槍頭(已滅菌)，移液槍，廢液缸。檢查離心機，廢液泵;

2)從培養(yǎng)箱拿出細胞，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，當SW756細胞狀態(tài)良好，且密度達到 85%左右的時候即可進行傳代;

4)打開廢液泵，用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個藍色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm 皿)到細胞培養(yǎng)皿中(若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS)，輕輕晃動以清洗細胞表面1-2次;

5)用廢液泵吸走 PBS 廢液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動以便胰酶浸泡到每個細胞，消化 1-3min(根據(jù)細胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時間長一點或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后，在顯微鏡下觀察細胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細胞胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

6)用 1ml 移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對細胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)毎灿袀?，把培養(yǎng)瓶中所有SW756細胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。

7)將裝有細胞懸液的離心管放入離心機中(配平)，1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min，用廢液泵取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后(充分混勻)，將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

8) 確定SW756細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動)。第二天再觀察細胞密度。

SW756細胞凍存準備

1) 準備工作：紫外線照臺 30min，準備好細胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS(試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時以上);傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管(已滅菌)，槍頭(已滅菌)，移液槍，廢液缸。檢查離心機，廢液泵;

2)從培養(yǎng)箱拿出細胞，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，待細胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細胞密度達 80–90%時，可進行細胞凍存操作，以T25 瓶為例

SW756細胞凍存步驟

a.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液， 在細胞凍存管上貼上細胞標簽(細胞標簽上包含：細胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的培養(yǎng)基)。

c.將凍存管入庫到-80 度凍存盒里，放置 24 小時后，即可移入液氮中保存，標記好入庫位置和凍存日期。

SW756人子宮鱗狀癌細胞培養(yǎng)常見問題

1. SW756細胞不貼壁的原因及解決辦法?

a.胰蛋白酶消化過度。建議縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。

b.支原體污染。分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

c.培養(yǎng)基pH值過堿(NaHCO3分解)。使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2;

d.SW756細胞老化。啟用新的保種細胞;

e.接種細胞起始濃度太低或太高。調(diào)節(jié)最佳接種細胞濃度。

2. SW756細胞生長周期變慢，邊養(yǎng)邊漂是什么原因?qū)е碌?

常見原因及解決方法：

a.細胞傳代時密度太稀或太密：建議細胞密度達80%左右進行傳代，傳代密度適中，密度過低會延長生長周期;

b.傳代操作不當：根據(jù)細胞特性決定細胞消化時間，一般在顯微鏡下觀察細胞回縮變圓并有少量細胞脫落即可終止消化，難消化的細胞可分次消化，每次時間不超過5min；頻繁換液或者清洗細胞也會導(dǎo)致細胞狀態(tài)變差，常規(guī)換液時間間隔為2~3天。

3. 傳代后SW756細胞變形?

原因及解決方法如下

a.變形，但細胞還在生長：可能是血清批次不一樣導(dǎo)致，血清成分復(fù)雜，不同批次和品牌間均存在成分差異，影響細胞狀態(tài)。建議使用同一批次血清，更換血清時需與原血清比例混合后使用，使細胞有過渡期；

b.變形，但細胞不長，且碎片增多：可能傳代操作過程損傷，常見于消化不當，或者潛在支原體等污染導(dǎo)致細胞病態(tài)；消化時間根據(jù)每個細胞的狀態(tài)來調(diào)整，消化過度或者消化不充分均會對細胞造成影響;培養(yǎng)過程應(yīng)嚴格無菌操作，實驗環(huán)境盡量潔凈，確保細胞無外源污染。

4.SW756細胞為什么出現(xiàn)空泡?

a.正常的細胞活動：有的細胞有正常的自噬行為或其他膜泡活動，無需特殊處理(如Caco-2細胞);

b.血清不適應(yīng)、培養(yǎng)基成分改變、換液不及時等造成細胞營養(yǎng)不良：可通過更換更合適的血清或及時換液等方法解決;

c.機械損傷、PH偏高或偏低等造成細胞受損：注意培養(yǎng)條件及操作手法。