常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法
常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來源,一般是來自實(shí)驗(yàn)服,并且具有氣候性,多雨······
發(fā)布時間:2024-07-01 17:01:53 細(xì)胞資源庫平臺 訪問量:364
小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系(Mouse Squamous Cell Carcinoma Cell Line)是一種用于科學(xué)研究和醫(yī)學(xué)研究的細(xì)胞模型。這種細(xì)胞系是從小鼠的鱗狀細(xì)胞癌腫瘤中分離出來的,并在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行培養(yǎng)和傳代,以供研究使用。
細(xì)胞名稱:SCC7,小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系
細(xì)胞別稱:SCC-7;SCCVII/St;SCCVII;SCC VII;小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系
種屬來源:小鼠
組織來源:皮膚
生長特性:貼壁生長
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞類型:鱗狀癌細(xì)胞系
保藏機(jī)構(gòu):中國典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫
培養(yǎng)基:DF12+10% FBS+1%PS
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
SCC7小鼠頭頸鱗癌細(xì)胞系培養(yǎng)操作說明
實(shí)驗(yàn)室條件
1. 無菌環(huán)境:無菌室包括更衣室,緩沖間,風(fēng)淋間,操作間
2. 儀器設(shè)備:超凈工作臺-操作平臺、CO2 培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴
鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級水
3. 器材耗材:玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍(lán)色 100-1000ul)、濾器,吸管,多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿,培養(yǎng)瓶等。
4. 試劑:DF12基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs
操作者工作范疇
1. 無菌操作:洗手,戴手套,穿實(shí)驗(yàn)服,常噴 75%酒精
1.準(zhǔn)備:紫外線照臺 30min,提前打開水浴鍋設(shè)置 37℃,培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘(或者放在超凈工作臺常溫放 30min)。在操作臺上擺放好物品,左邊放完全培養(yǎng)液,1mL 槍頭(已滅菌),培養(yǎng)皿,右上角放廢液缸,1mL 移液槍,3mL 巴氏管。檢查離心機(jī),廢液泵。
2)待水浴鍋溫度達(dá)到 37℃時,戴上手套和護(hù)目鏡,從-196℃液氮罐中取出凍存管,將含有1 mLSCC7小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,同時不斷輕輕搖動凍存管,盡量保證凍存管內(nèi)細(xì)胞 1min 內(nèi)融化,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻, 移入離心機(jī)中 100rpm 離心 3min,以 75%酒精噴凍存管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。
3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 6cm 培養(yǎng)皿中,(若離心后細(xì)胞量較多,可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 10cm 培養(yǎng)皿中),標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細(xì)胞名稱。
4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清,取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻),將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)皿中,將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻SCC7小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻),最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細(xì)胞。
5)確定SCC7小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞已鋪勻后,再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動),第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
1) 準(zhǔn)備工作:紫外線照臺 30min,準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品:培養(yǎng)液,胰酶,PBS(試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時以上);傳代用培養(yǎng)皿,巴士管,離心管(已滅菌),槍頭(已滅菌),移液槍,廢液缸。檢查離心機(jī),廢液泵;
2)從培養(yǎng)箱拿出SCC7小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞,在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài),當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好,且密度達(dá)到 85%左右的時候即可進(jìn)行傳代;
4)打開廢液泵,用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個藍(lán)色槍頭吸走上清廢液,用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm 皿)到細(xì)胞培養(yǎng)皿中(若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS),輕輕晃動以清洗細(xì)胞表面1-2次;
5)用廢液泵吸走 PBS 廢液,加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中,拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動以便胰酶浸泡到每個細(xì)胞,消化 1-3min(根據(jù)細(xì)胞貼壁情況判斷,貼壁較牢的消化時間長一點(diǎn)或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后,在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓變亮,一旦發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞胞質(zhì)回縮,細(xì)胞間隙增大,即將脫離培養(yǎng)皿底,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
6)用 1ml 移液槍輕柔吹打,保證培養(yǎng)皿底的每個角落都吹打到,邊緣處也不能忽略(吹打時盡量避免產(chǎn)生氣泡,因其對SCC7小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞有傷害;需輕柔吹打,用力吹打?qū)?xì)胞也有傷害),把培養(yǎng)瓶中所有細(xì)胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。
7)將裝有SCC7小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞懸液的離心管放入離心機(jī)中(配平),1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min,用廢液泵取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清,取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻),將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻),最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細(xì)胞。
8) 確定細(xì)胞已鋪勻后,再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動)。第二天再觀察細(xì)胞密度。
1) 準(zhǔn)備工作:紫外線照臺 30min,準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品:培養(yǎng)液,胰酶,PBS(試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時以上);傳代用培養(yǎng)皿,巴士管,離心管(已滅菌),槍頭(已滅菌),移液槍,廢液缸。檢查離心機(jī),廢液泵;
2)從培養(yǎng)箱拿出SCC7小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞,在顯微鏡下觀察Hela細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài),待細(xì)胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下,細(xì)胞密度達(dá) 80–90%時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作,以T25 瓶為例
a.收集scc7細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng)液,將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b.根據(jù)scc7細(xì)胞系數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液, 在細(xì)胞凍存管上貼上細(xì)胞標(biāo)簽(細(xì)胞標(biāo)簽上包含:細(xì)胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基)。
c.將凍存管入庫到-80 度凍存盒里,放置 24 小時后,即可移入液氮中保存,標(biāo)記好入庫位置和凍存日期。
C3H小鼠。SCC7細(xì)胞是一種被用于研究皮膚癌和癌癥生物學(xué)的細(xì)胞系。SCC7細(xì)胞來自于C3H小鼠,是一種小鼠皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系。C3H小鼠是實(shí)驗(yàn)室中常用的小鼠品系,廣泛應(yīng)用于癌癥研究和藥物篩選等領(lǐng)域。SCC7細(xì)胞的原始來源可能與C3H小鼠體內(nèi)的皮膚鱗狀細(xì)胞癌病灶有關(guān)。這些細(xì)胞被提取、培養(yǎng)和保存,以供科學(xué)家進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究和疾病模型研究。
scc7細(xì)胞培養(yǎng)基為DF12+10% FBS+1%PS。
1996年始,迄今為止,關(guān)于小鼠頭頸鱗癌細(xì)胞系的文獻(xiàn)已有118篇。
在pubmed數(shù)據(jù)庫中用“SCC7 murine”搜索該關(guān)鍵詞,第一篇為1996年P(guān) G Braunschweiger在Radiat Res.發(fā)表的“Radioresistance in murine solid tumors induced by interleukin-1”。
IL-1α對腫瘤細(xì)胞放射敏感性的影響尚未充分研究。
IL-1α給藥后,腫瘤克隆細(xì)胞表現(xiàn)出放射抵抗性,特征是放射劑量參數(shù)的變化,類似于缺氧條件下的放射抵抗性。
IL-1α與替拉帕胺具有協(xié)同抗腫瘤作用,表明放射抵抗性與缺氧有關(guān)● 放射抵抗性是暫時的,可能在12小時內(nèi)發(fā)生重新供氧。
在有氧條件下,IL-1α對SCC-7細(xì)胞的無直接影響,但在原代培養(yǎng)中可誘導(dǎo)放射抵抗性。
腫瘤巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的氧化應(yīng)激可能是IL-1α在體外誘導(dǎo)放射抵抗性的原因。
體內(nèi)和體外的氧化應(yīng)激響應(yīng)可能具有不同的機(jī)制來調(diào)節(jié)腫瘤放射敏感性。
小鼠頭頸鱗癌細(xì)胞(SCC7)是一種高糖酵解的細(xì)胞類型,這一特性在腫瘤細(xì)胞中常見,因?yàn)樗鼈兺ǔT诘脱醐h(huán)境下進(jìn)行代謝,需要快速獲取能量。
SCC7具有強(qiáng)大的增殖能力,研究人員常用SCC7來研究頭頸鱗癌的增殖和凋亡,以及免疫過程在當(dāng)中起到的關(guān)鍵作用。
由于頭頸鱗癌腫瘤具有很強(qiáng)的生長和轉(zhuǎn)移能力,學(xué)者也經(jīng)常利用SCC7細(xì)胞研究糖基化和自糖基化在細(xì)胞形態(tài)和功能中起關(guān)鍵作用。
研究人員可以利用SCC7細(xì)胞構(gòu)建裸鼠/SCID小鼠/NOD-SCID小鼠荷瘤鼠模型,來研究頭頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制、治療策略和預(yù)后分析。預(yù)后分析通常包括對小鼠存活時間、腫瘤體積、轉(zhuǎn)移情況等參數(shù)的監(jiān)測和統(tǒng)計(jì)分析。研究者可能會采用生存分析方法,比如Kaplan-Meier生存曲線和Cox比例風(fēng)險模型,來評估不同處理組間的生存差異和相關(guān)因素的影響。
SCC7還具有基因沉默機(jī)制,用于調(diào)節(jié)細(xì)胞基因表達(dá);外泌體細(xì)胞間可以起到信息傳遞的作用。研究人員可以利用SCC7研究這些機(jī)制,使用納米藥物靶向干預(yù)靶點(diǎn),抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移,同時增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的反應(yīng)。
在治療方面,研究人員可以利用移植該細(xì)胞的荷瘤鼠模型研究丹酚酸等藥物的抑癌和促凋亡機(jī)制;以及使用金納米棒作為化療耐藥干預(yù)手段,理解頭頸鱗癌的生物學(xué)特征和潛在治療策略。
CK5、CK14、CK17、p63、E-cadherin等,這些標(biāo)志物通常參與了鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程。
常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來源,一般是來自實(shí)驗(yàn)服,并且具有氣候性,多雨······
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