H9C2細(xì)胞描述

大鼠心肌細(xì)胞H9C2是來源于胚胎期BD1X大鼠心臟組織的亞克隆細(xì)胞系，表現(xiàn)很多骨骼肌細(xì)胞的特性。當(dāng)H9c2細(xì)胞匯合時，細(xì)胞就會融合成多核的肌管并對乙酰膽堿刺激有反應(yīng)，但該細(xì)胞缺少像心肌細(xì)胞一樣的節(jié)律性搏動。此外，多項(xiàng)生化、電生理指標(biāo)的檢測也表明其具有骨骼肌的很多特點(diǎn)。由于來源于心臟，H9C2細(xì)胞作為心臟成肌細(xì)胞也用于心肌疾病的研究。大鼠心肌細(xì)胞H9C2增殖能力取決于細(xì)胞取材、培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)條件等綜合因素。請按照正確的培養(yǎng)方法來解凍、傳代，以此保證細(xì)胞具備良好的增殖能力，方便您的后繼研究順利進(jìn)行。

CCC細(xì)胞庫H9C2細(xì)胞圖片

逸漠細(xì)胞庫H9C2細(xì)胞圖片

H9C2細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

提前開啟紫外照射30min消毒滅菌，工作臺開燈通風(fēng)10min，用75%酒精擦拭臺面。

器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色0-10ul;黃色20-200ul;藍(lán)色100-1000ul)、濾器、吸管、多孔培養(yǎng)皿、6cm皿、10cm皿，培養(yǎng)瓶等。

試劑：DMEM培養(yǎng)液、緩沖液、PBS、消化液、血清、抗生素。

H9C2細(xì)胞培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：90%DMEM+10%FBS+P/S

生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3，每周 2-3次

凍存條件：無血清凍存液(或者冷凍保存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配)，液氮儲存

H9c2 (2-1)細(xì)胞培養(yǎng)操作

H9c2 (2-1)復(fù)蘇操作方法

1.將含有1 mL H9c2 (2-1)細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。

2.在1000 rpm條件下離心5 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。

3.然后將所有H9c2(2-1)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

H9c2(2-1)細(xì)胞傳代處理

如果H9c2 (2-1)細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗H9c2(2-1)細(xì)胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有H9c2 (2-1)細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min(視細(xì)胞情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

3.將H9c2(2-1)細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

H9c2(2-1)細(xì)胞凍存操作

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面 T25 瓶為例

1.收集H9c2(2-1)細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.根據(jù)H9c2(2-1)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

H9c2(2-1)細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1.H9c2(2-1)細(xì)胞溶解過程要迅速，已溶解的凍存細(xì)胞不能在常溫下存放太久，需要盡快離心去除DMSO。

2.H9c2(2-1)細(xì)胞凍存時，盡量吹散細(xì)胞，注意控制吹打力度。

H9c2細(xì)胞常見問題及解答

為什么H9c2細(xì)胞培養(yǎng)會出現(xiàn)細(xì)胞表面顆粒較多的現(xiàn)象?

可能是培養(yǎng)環(huán)境有問題，可以改用DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)，傳三代后會恢復(fù)平整細(xì)胞表面。

H9C2細(xì)胞可以傳幾代?

細(xì)胞系是可以傳代的，理論上是可以無限傳代的，也就是永生化細(xì)胞，但是研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞系也會有老化的;收到細(xì)胞后自己具體可以傳多少代，會受到客戶自己養(yǎng)細(xì)胞的操作水平技術(shù)，操作環(huán)境，用的試劑耗材的質(zhì)量等因素影響的。

為什么H9c2細(xì)胞培養(yǎng)會出現(xiàn)空泡?

可能是鋪板時鋪得不夠均勻，局部過于密集，密集地方的細(xì)胞就開始狀態(tài)變差、空泡增多。也可能是血清差，需要更換優(yōu)質(zhì)血清，及時換液。

為什么H9c2細(xì)胞培養(yǎng)長得慢?

這些因素都會影響細(xì)胞長得慢：

1.沒有保證密度，細(xì)胞長不起來，可以先培養(yǎng)，然后消化重新鋪瓶，提高密度培養(yǎng)

2.操作時力度沒控制好，將細(xì)胞吹碎，狀態(tài)變差

3.血清質(zhì)量不好，影響細(xì)胞生長

為什么H9c2細(xì)胞狀態(tài)變差，容易漂?

可能是血清問題，建議換血清，并注意血清要程序解凍，不能水浴化開;也有可能是細(xì)胞生長密集，需要及時傳代，并不是細(xì)胞長滿才傳代，當(dāng)有個別地方長得過于密集，容易疊加的時候應(yīng)該就要傳代了。

是否可以在 H9C2 細(xì)胞系中誘導(dǎo)細(xì)胞肥大?

據(jù)報(bào)道，血管緊張素 II、異丙腎上腺素、內(nèi)皮素-1、膽固醇(甲基-β-環(huán)糊精)、晚期糖基化終產(chǎn)物、去氧腎上腺素、菲、地塞米松、葫蘆素-I、溴酸鉀、抵抗素、高葡萄糖等可誘導(dǎo)大鼠細(xì)胞肥大胎兒心肌細(xì)胞 H9c2。

測量 H9C2 細(xì)胞大小的最佳染色技術(shù)是什么?

可以使用小麥胚芽凝集素 (WGA) 。它可染色細(xì)胞膜表面的糖蛋白，并可染色心肌細(xì)胞中的 t 小管 (Savio-Galimberti 等人，2008)。

H9C2 細(xì)胞培養(yǎng)無小事，在培養(yǎng)過程中，每一步操作都要輕柔小心，以免細(xì)胞受損;選用優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基，減少有害物質(zhì)對細(xì)胞的刺激。