穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)常見(jiàn)問(wèn)題有哪些

1.花費(fèi)時(shí)間和經(jīng)費(fèi)構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株有必要嗎

如果您需要對(duì)過(guò)表達(dá)或者表達(dá)降低目的基因的細(xì)胞進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)，那么構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株是有必要的。

第一，可以減少不同批次實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)染效率差異帶來(lái)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異，提高實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。

第二，構(gòu)建好細(xì)胞系后不必再進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以及反復(fù)制備質(zhì)粒，減少工作量。

第三，不再使用價(jià)格高昂的轉(zhuǎn)染試劑，節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。

2.所有的細(xì)胞株都可以構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系嗎

不是所有的細(xì)胞株都能構(gòu)建成為穩(wěn)定細(xì)胞系的。構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系需要滿足2個(gè)條件：

1、細(xì)胞能穩(wěn)定傳代;

2、細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率滿足要求。

3.你們實(shí)驗(yàn)成功率怎樣

我們逸漠細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞100%均可達(dá)到要求，并構(gòu)建成功。構(gòu)建不成功我們免收一切費(fèi)用。

4.你們用什么方法構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株呢

我們是用慢病毒轉(zhuǎn)染的方法構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株的。該系統(tǒng)的特點(diǎn)是目的基因先整合到基因組上再表達(dá)，沒(méi)有瞬時(shí)表達(dá)過(guò)程。因此篩選出的細(xì)胞都是穩(wěn)定整合的。

5.目的基因能穩(wěn)定表達(dá)幾代?是否提供傳代穩(wěn)定性數(shù)據(jù)

慢病毒系統(tǒng)的特點(diǎn)決定了目的基因會(huì)像細(xì)胞自身基因一樣一直表達(dá)，不會(huì)在傳代過(guò)程中丟失。我們可以提供10代、15代傳代穩(wěn)定性檢測(cè)，但需要收取額外費(fèi)用。

6.構(gòu)建好的穩(wěn)定細(xì)胞系如何培養(yǎng)和保存

我們提供的單克隆和多克隆細(xì)胞系培養(yǎng)和保存均與原來(lái)的細(xì)胞株無(wú)異，無(wú)需抗生素維持。

7.單克隆和多克隆細(xì)胞株的區(qū)別是什么

單克隆細(xì)胞是轉(zhuǎn)染目的基因后經(jīng)過(guò)克隆篩選得到的，由一個(gè)細(xì)胞擴(kuò)增形成的細(xì)胞株，目的基因整合的位置和拷貝數(shù)都是一致的，可以長(zhǎng)期維持表達(dá)量不變。

多克隆細(xì)胞是轉(zhuǎn)染目的基因后直接經(jīng)抗藥基因篩選得到的。是多種陽(yáng)性細(xì)胞克隆的混合。

8.如何選擇合適的慢病毒載體?

選擇慢病毒載體主要需要考慮啟動(dòng)子選擇、是否需要熒光蛋白標(biāo)簽、熒光蛋白標(biāo)簽是否需要融合表達(dá)。常用的慢病毒有plv-puro，plv-egfp-c，plv-egfp(2a)puro。

9.構(gòu)建細(xì)胞株需要多長(zhǎng)時(shí)間

一般多克隆細(xì)胞株需要1個(gè)月到1個(gè)半月，單克隆細(xì)胞株需要2-3個(gè)月時(shí)間。

10.提供的實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括什么

細(xì)胞株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)報(bào)告、目的基因realtime-pcr檢測(cè)報(bào)告、含有熒光蛋白的細(xì)胞提供細(xì)胞熒光照片。如果需要提供western-blot檢測(cè)服務(wù)，需要您提供一抗并收取額外費(fèi)用。