4t1細胞是什么細胞

4T1細胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細胞株。當4T1細胞注射到BALB/c小鼠中時，4T1細胞會自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺、肝、淋巴結(jié)和大腦，同時在注射部位形成始發(fā)灶，誘導轉(zhuǎn)移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1細胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近，這種腫瘤是人Ⅵ期乳腺癌的動物模型。4T1細胞誘導的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動力學相近，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。4T1細胞誘導的腫瘤模型跟其他腫瘤模型相比，由于4T1細胞的抗6-硫鳥嘌噙特性，微小的轉(zhuǎn)移細胞團(少到僅僅1個)也可以在許多遠端器官中檢測到，沒必要數(shù)淋巴結(jié)或稱重器官。

小鼠乳腺癌細胞4T1形態(tài)

逸漠細胞庫4T1細胞圖片

4T1細胞用什么培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

4T1細胞培養(yǎng)實驗準備

提前開啟紫外照射30min消毒滅菌，工作臺開燈通風10min，用75%酒精擦拭臺面。

器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色0-10ul;黃色20-200ul;藍色100-1000ul)、濾器、吸管、多孔培養(yǎng)皿、6cm皿、10cm皿，培養(yǎng)瓶等。

試劑：DMEM培養(yǎng)液、緩沖液、PBS、消化液、血清、抗生素。

4T1細胞培養(yǎng)條件

形態(tài)特征：上皮細胞樣，貼壁生長

培養(yǎng)基： 90%DMEM+10% FBS+PS

生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3，每周 3次

凍存條件：無血清凍存液(或者冷凍保存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配)，液氮儲存

4T1細胞培養(yǎng)注意事項

1.運輸4T1細胞用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

2.收到4T1細胞后第一次傳代建議1：2傳代 。注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

4T1細胞養(yǎng)操作步驟

4T1細胞復(fù)蘇方法

1.將含有1 mL4T1細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻;

2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻;

3.將所有4T1細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜);

4.第三天換液并檢查4T1細胞密度。

4T1細胞傳代方法

如果4T1細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細胞消化情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

3.將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4T1細胞凍存方法

待4T1細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例

1.收集4T1細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，然后進行細胞計數(shù)。

2.根據(jù)4T1細胞數(shù)量對應(yīng)加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

4T1小鼠乳腺癌細胞培養(yǎng)常見問題

1.4T1小鼠乳腺癌細胞出現(xiàn)細胞團怎么處理?

4T1細胞團比較重，低離沒有用，貼的不牢就Pbs洗一下，用巴氏管吹不能用槍頭。這種不影響細胞生長，不處理也行。

2.4T1細胞消化時間是建議多久呢?

4T1放培養(yǎng)箱5分鐘左右鏡下觀察在終止，4T1細胞是易脫落也易報團，所以不能看細胞脫落了就終止，要多消化一下。

3.4T1小鼠乳腺癌細胞培養(yǎng)注意事項?

a.4T1細胞生長速度快，細胞匯合度越高越難消化，建議分次消化。一次消化至有細胞移動漂浮時終止，再進行二次消化剩余的細胞，盡量消化成單顆細胞，細胞傳代第二天有少量細胞團貼壁未展開為正常現(xiàn)象，繼續(xù)培養(yǎng)細胞會展開;

b.若在培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞變圓現(xiàn)象，有可能是細胞密度過大，無法展開的原因，可通過降低傳代密度來改善。

4.4T1小鼠乳腺癌細胞培養(yǎng)過程中細胞變得瘦長?

可能細胞密度過大，沒有及時換液，可以血清多補加5%看下。

5.小鼠4T1細胞不長怎么處理?

這些因素都會影響細胞長得慢：a.沒有保證密度，細胞長不起來;b.操作時力度沒控制好，將細胞吹碎，狀態(tài)變差;c.血清質(zhì)量不好，影響細胞生長。

6.4t1細胞形態(tài)特征?

4T1細胞形態(tài)特征為上皮細胞樣，貼壁生長。

7.4t1細胞用高糖DMEM嗎?

是的，用高糖DMEM。

8.4T1細胞能成瘤嗎?

Yes，forms tumors and metastasizes in BALB/c mice.

9.小鼠4T1細胞傳代密度是多少?

4T1細胞建議在生長至80%匯合度時即應(yīng)傳代，以免細胞狀態(tài)變差。

10.4T1細胞培養(yǎng)出現(xiàn)小黑點，怎么處理?

如果在顯微鏡下觀察到了小黑點，基本上可以將范圍縮小到是細菌污染或者細胞碎片這兩種情況。

到底是污染還是碎片，可從以下幾個方面進行判斷：

1) 運動性

很多會動的小黑點，只是發(fā)生布朗運動的細胞碎片。在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規(guī)則，是否運動，是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規(guī)則，做布朗運動，黑點可能是細胞碎片(可能是細胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細胞的代謝產(chǎn)物。

處理方法：消化離心棄上清后，PBS重懸洗洗，750rpm低速離心4分鐘，重新鋪下，鋪回去鏡下觀察一下是不是干凈的

如果黑點大小一致，快速移動，很可能是細菌污染。

2)培養(yǎng)基的渾濁度

如果在顯微鏡下無法辨認，那就交給時間吧。細胞培養(yǎng)基對于細菌來說是非常營養(yǎng)的大餐。一旦發(fā)生污染，細菌就會大量繁殖。培養(yǎng)基PH值迅速下降，培養(yǎng)基變黃且會變渾濁。通常在12小時內(nèi)就可以發(fā)現(xiàn)，而在48小時內(nèi)就非常明顯。

4T1細胞在研究中的應(yīng)用

4T1是一種可移植的小鼠乳腺癌細胞系。它被廣泛地用作體外腫瘤模型，用于研究人類乳腺癌。4T1細胞有高度的侵襲性和腫瘤形成能力；它們傾向于從乳腺的原發(fā)腫瘤部位轉(zhuǎn)移至其他部位，包括肝臟、淋巴結(jié)、肺、骨骼和腦部，因此是研究乳腺癌轉(zhuǎn)移的理想選擇。

4T1是一種乳腺腫瘤細胞系，起源于BALB/c小鼠的自發(fā)性乳腺腫瘤。這些高度侵襲性和腫瘤原性的細胞在生長和轉(zhuǎn)移擴散方面，與人類乳腺癌的行為非常相似。具體而言，4T1腫瘤模型研究三陰性乳腺癌(TNBC)。

4T1小鼠乳腺癌細胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細胞株，它的高腫瘤發(fā)生率和存活率使其成為動物水平乳腺癌研究的理想細胞模型。

乳腺癌是全球女性最常見的癌癥之一，對公眾健康構(gòu)成了嚴重威脅。在多種乳腺癌亞型中，4T1小鼠乳腺癌細胞的生物學特性及腫瘤轉(zhuǎn)移潛能引起了科研人員的特別關(guān)注。4T1細胞來源于410-6乳腺癌細胞，其能在BALB/c小鼠中產(chǎn)生自發(fā)性的肺轉(zhuǎn)移，這一特性使其在研究乳腺癌轉(zhuǎn)移機制及探索新型治療策略方面成為一個有價值的模型。

4T1小鼠乳腺癌細胞具有高度的侵襲性和轉(zhuǎn)移潛能，其通過激活Src通路、誘導上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)以及引發(fā)免疫逃避等機制促進腫瘤轉(zhuǎn)移。此外，4T1細胞還能產(chǎn)生大量的炎性細胞因子，如IL-6、IL-8和MCP-1，從而引發(fā)炎癥反應(yīng)，進一步促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。

4T1細胞在癌癥治療中的應(yīng)用

4T1細胞的自發(fā)性轉(zhuǎn)移能力使其在癌癥治療研究中具有很高的價值。例如，研究人員可以利用4T1細胞建立乳腺癌原位模型，然后評估各種藥物對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的抑制效果。由于4T1細胞能引發(fā)強烈的炎癥反應(yīng)，研究人員也可以利用其探索炎癥在腫瘤進展中的作用，以及探索如何通過抑制炎癥來抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。

此外，4T1細胞還能用于研究腫瘤免疫逃逸的機制以及探索免疫治療在乳腺癌治療中的應(yīng)用。例如，通過敲除某些免疫相關(guān)的基因，研究人員可以觀察到腫瘤免疫微環(huán)境的改變，進而研究這些改變對腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的影響。

4T1細胞提供了一種研究乳腺癌轉(zhuǎn)移的模型，可以用來研究乳腺癌的發(fā)病機制、預(yù)測癌細胞的侵襲性和研究針對乳腺癌的治療方法。4T1細胞的轉(zhuǎn)移特性使其成為研究腫瘤治療新藥的理想模型，因為它們可以向不同的器官轉(zhuǎn)移，這是許多其他腫瘤細胞系所缺乏的。

近年來，基于4T1細胞的乳腺癌轉(zhuǎn)移模型已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于研究抗癌治療的新藥物，包括免疫治療、靶向治療等新型治療方法。這些治療方法都是通過抑制或干擾腫瘤細胞的生長、分化或擴散，來阻止腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，從而提高患者的生存率。