小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞背景簡介

小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腦組織;腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障的主要組成成分，它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，能夠限制可溶性物質(zhì)和細(xì)胞等從血液進(jìn)入大腦，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與外周內(nèi)皮細(xì)胞相比具有一些相同特性。它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在腦血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。與外周內(nèi)皮細(xì)胞相同，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)細(xì)胞粘附分子，調(diào)控白細(xì)胞進(jìn)入大腦。由于微血管內(nèi)皮細(xì)胞的器官特異性，內(nèi)皮細(xì)胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織。

其主要特征如下

1.腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞存在許多細(xì)胞間緊密連接，產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗，延遲細(xì)胞旁的通量

2.腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺乏內(nèi)皮細(xì)胞的窗孔結(jié)構(gòu)，其液相物質(zhì)胞飲水平較低

3.腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有不對稱定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，從而產(chǎn)生“兩極分化”的表現(xiàn)型。

小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)方法視頻教程

主要試劑

小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用消化酶I、小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用消化酶II、HBSS、血清、小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基I、小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基II、明膠、清洗液、分選buffer

小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞操作步驟

腦組織獲取及消化

1. 用1%明膠提前被包好T25培養(yǎng)瓶。

2. 在無菌條件下斬首小鼠并解剖大腦

3. 用刮刀和鑷子將嗅球和小腦分開。

4. 將去掉腦膜的腦組織放入加入預(yù)冷的HBSS溶液中，用鑷子夾碎組織。

5. 靜置，小心地取出溶液，并加入1ml HBSS以洗滌組織。

6. 將組織懸液轉(zhuǎn)移到15ml錐形管中。靜置直到組織沉淀，然后除去上清液。

7. 加入1ml 專用消化酶I，37℃消化20min，每5min翻轉(zhuǎn)震蕩

8. 加入1mL 血清終止消化，槍頭緩慢吹吸，室溫離心 800xg，5min，棄上清

9. 加入2mL 25%BSA，重懸沉淀，室溫離心1500xg，15min，棄上清

10. 加入1ml 專用消化酶II，37℃消化30min

11. 加入1mL 血清終止消化，吹吸多次 ，室溫離心 800xg，15min，棄上清

12. 加入5ml小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基I重懸，鋪入明膠包被的培養(yǎng)皿，每兩三天換液

13. 培養(yǎng)5-7天進(jìn)行傳代，去除星膠和周細(xì)胞，專用消化酶I，37℃消化6min

14. 加入1mL 血清終止消化，離心 400xg，5min，棄上清

15. 加入5ml專用培養(yǎng)基II重懸，鋪入1%明膠包被T25。純化腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞。