本視頻為廈門逸漠生物科技有限公司出品關(guān)于復(fù)蘇細(xì)胞到貨如何處理，我們對(duì)每一步操作都做了演示，以便實(shí)驗(yàn)者更好地理解常溫運(yùn)輸細(xì)胞轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)過程。

細(xì)胞收貨處理(T25瓶)

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

提前開啟紫外照射30min消毒滅菌，工作臺(tái)開燈通風(fēng)10min，用75%酒精擦拭臺(tái)面

所需試劑物品

完全培養(yǎng)基、胰酶、PBS

到貨處理

1.在細(xì)胞間拆封包裹，閱讀細(xì)胞說明書和檢測(cè)報(bào)告

2.取出T25瓶，檢查是否在運(yùn)輸過程中破損，在顯微鏡下鏡檢并拍照存檔

3.放入培養(yǎng)箱穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，約2-4小時(shí)

4.2-4小時(shí)后拿出T25細(xì)胞瓶，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定密度85%以上，即進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)移步驟

細(xì)胞遷移步驟

第一步：吸出運(yùn)輸用培養(yǎng)基，加入5m」1xPBS清洗1遍，去掉PBS，加入2m1胰酶消化，并放入培養(yǎng)箱孵育1-2min

第二步：在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否脫落，加入3mI完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞，使其脫離瓶壁

第三步：細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15ml離心管中，1000rpm離心5min

第四步：拿出一個(gè)新的10cm培養(yǎng)皿，加入8-10ml完 全培養(yǎng)基，在皿上標(biāo)記細(xì)胞名稱，培養(yǎng)基名稱，日期

第五步：離心結(jié)束后，用75%的酒精噴管身后，放回工作臺(tái)中，去上清，加入1m]完全培養(yǎng)基，重懸后加到10cm培養(yǎng)皿中，放入37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)

注意事項(xiàng)

1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系

2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照(當(dāng)天以及第 2,3 天請(qǐng)拍照)，記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)

3.由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決

4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致