細(xì)胞產(chǎn)品是很多科研老師實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)，一支小小的細(xì)胞，關(guān)乎各種實(shí)驗(yàn)的成功與否，細(xì)胞的”小事情“，在實(shí)驗(yàn)中都是”大事情“，所以準(zhǔn)備工作對(duì)開(kāi)展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，準(zhǔn)備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒。

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實(shí)驗(yàn)室工作的主要區(qū)別在于要求保持無(wú)菌操作，避免微生物及其他有害因素的影響。一般標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)室應(yīng)包括配液室、準(zhǔn)備室和培養(yǎng)室。三室既相互連接又相對(duì)獨(dú)立，各自完成培養(yǎng)過(guò)程中的不同操作。

常見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室配置及各自對(duì)應(yīng)的設(shè)備有哪些

1.實(shí)驗(yàn)室設(shè)置

(1)配液室

(2)準(zhǔn)備室

(3)培養(yǎng)室

培養(yǎng)室內(nèi)要完全密閉，保持恒定的溫度，在設(shè)計(jì)上要注意以下幾點(diǎn)

a.培養(yǎng)室的位置最好設(shè)在陰面，陽(yáng)光不能直接照射的地方，防止室內(nèi)溫度增高。

b.天花板的高度不要超過(guò)2米，以保證紫外燈的有效殺菌效應(yīng)。

c.門(mén)一般用拉門(mén)，以防止空氣流動(dòng)。

d.天花板、地板和四周墻壁要光滑無(wú)死角，要鑲瓷磚或涂油漆，這樣設(shè)計(jì)，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墻角堆積灰塵。

2.實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備

(1)準(zhǔn)備室的設(shè)備

a.雙蒸餾水蒸餾器：制備雙蒸水。

b.酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。

c.烤箱：洗滌完的玻璃器皿用烤箱烘干。

d.高壓鍋：玻璃器皿、解剖用具、部分液體、塑料器具等滅菌。不同物品其有效滅菌壓力和時(shí)間不同。

e.儲(chǔ)品柜1：放置未消毒物品。

f.儲(chǔ)品柜2：放置已消毒物品。

g.包裝臺(tái)：滅菌前的包裝用。

準(zhǔn)備室注意事項(xiàng)

a.預(yù)防蒸餾器被烤干。

b.放置水池中的水滲出。

c.勿將酸液濺到衣物或地面。

d.勿將高壓鍋排氣閥和安全閥堵塞。

e.已消毒物品應(yīng)與未消毒物品分柜存放。

(2)配液室的設(shè)備

a.天平(扭力天平和電子天平)：稱(chēng)量用

b.pH計(jì)

c.磁力攪拌器

(3)細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)備

1)超凈工作臺(tái)

超凈工作臺(tái)的種類(lèi)很多，有單面單人、單面雙人、雙面雙人或雙面四人等，其工作原理是利用鼓風(fēng)機(jī)，使通過(guò)高效濾氣的空氣，徐徐通過(guò)臺(tái)面，這樣使工作環(huán)境中具無(wú)菌而均勻的空氣。

根據(jù)層流方式的不同，超凈工作臺(tái)主要分為水平層流式和垂直層流式兩種，基本原理大致相同，都是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過(guò)濾器初濾，由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱，再經(jīng)高效空氣過(guò)濾器，由此送出的潔凈氣流從一定的均勻的斷面風(fēng)速通過(guò)無(wú)菌，從而形成無(wú)塵無(wú)菌的高潔凈度工作環(huán)境。但兩種凈化臺(tái)的氣流方向不同。

使用超凈工作臺(tái)應(yīng)注意的幾點(diǎn)問(wèn)題

a.凈化工作臺(tái)最好安裝在無(wú)塵的房間內(nèi)，最好為隔離好的無(wú)菌間內(nèi)，以免塵土過(guò)多易使濾器阻塞，降低凈化效果，縮短使用壽命。

b.新安裝的或長(zhǎng)期未使用的工用臺(tái)，工作前必須對(duì)工作臺(tái)和周?chē)h(huán)境用真空吸塵器或不產(chǎn)生纖維的工具進(jìn)行清潔工作，再采用藥物滅菌法或紫外線(xiàn)滅菌法進(jìn)行滅菌處理。

c.每次使用工作臺(tái)時(shí)，應(yīng)先用75%酒精擦洗臺(tái)面，并提前以30~50min紫外線(xiàn)滅菌燈處理凈化工作區(qū)內(nèi)積累的微生物。在關(guān)閉紫外燈后應(yīng)啟動(dòng)送風(fēng)機(jī)使之運(yùn)轉(zhuǎn)兩分鐘后再進(jìn)行培養(yǎng)操作。

d.凈化工作區(qū)內(nèi)不應(yīng)存放不必要的物品，以保持潔凈氣流型不受干擾。

e.一般情況下，高效過(guò)濾器三年更換一次。更換高效濾器應(yīng)請(qǐng)專(zhuān)業(yè)人員操作，以保持密封良好。要定期將粗過(guò)濾器中的過(guò)布(無(wú)紡布)拆下清洗，時(shí)間應(yīng)根據(jù)環(huán)境潔凈程度而定，通常間隔3~6個(gè)月進(jìn)行一次。

f.每次使用凈化臺(tái)要及時(shí)清除工作臺(tái)面上的物品，并用灑精擦洗臺(tái)面使之始終保持潔凈。

2) 4℃冰箱和低溫冰箱

3)CO2 培養(yǎng)箱

a.一定濃度的CO2 對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)，尤其是原代培養(yǎng)和單細(xì)胞培養(yǎng)有促進(jìn)作用(5%)。

b.一定濃度的CO2 可維持培養(yǎng)液恒定的pH。適用于開(kāi)放培養(yǎng)，培養(yǎng)箱封口后，可在一般恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，但是采用培養(yǎng)皿或多孔板培養(yǎng)時(shí)，則需要高濕度和高CO2 含量的空氣。

c.它增加了濕度，箱體內(nèi)裝有水浴，可以保證培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度。

d.培養(yǎng)箱內(nèi)裝有紫外燈。

e.通過(guò)氣體流量計(jì)可以調(diào)節(jié)CO2 和空氣的比例。

f.在水中可加入防腐劑(二氧乙酸)?？煞乐挂駽O2培養(yǎng)箱中濕度較高，易長(zhǎng)霉菌。

4)臭氧發(fā)生器

5)離心機(jī)

6)CO 2 鋼瓶

7)液氮罐

8)儲(chǔ)品柜：用來(lái)存放雜物

9)紫外燈

10)>空氣凈化系統(tǒng)

11)倒置顯微鏡

3.無(wú)菌操作

(1)無(wú)菌室的滅菌

a.紫外燈無(wú)人時(shí)就要打開(kāi);

b.進(jìn)無(wú)菌室要穿無(wú)菌服、戴帽子和口罩;

c.每周清洗消毒一次;

d.所用物品要以外科手術(shù)方式嚴(yán)格消毒;

e.室內(nèi)臺(tái)面。

細(xì)胞培養(yǎng)人員注意事項(xiàng)

1)進(jìn)入細(xì)胞房前必須穿上已消毒的實(shí)驗(yàn)服，換拖鞋，并將實(shí)驗(yàn)服袖口向內(nèi)卷起，將其它衣服袖口包于其內(nèi)。

2)進(jìn)入細(xì)胞房，戴上手套，開(kāi)紫外燈半小時(shí)。半小時(shí)后，用酒精棉將工作臺(tái)擦拭一遍，并噴灑酒精，對(duì)工作臺(tái)及其內(nèi)物品內(nèi)進(jìn)行消毒;點(diǎn)燃酒精燈。

3)依次放入裝培養(yǎng)液的試劑瓶，培養(yǎng)瓶，小牛血清瓶，胰酶離心管，DMSO瓶，雙抗瓶，PBS 瓶，50ml 燒杯兩個(gè)，100-1000ul 移液器，一次性滴管若干，空離心管兩個(gè)(15ml)。

4)所有放入超凈工作臺(tái)或細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)的物品，如手套，記號(hào)筆，離心管，試劑瓶，滴管，凍存管，培養(yǎng)瓶，試管架，槍頭盒，移液器，燒杯，96孔板等需先75%酒精消毒后，方可放入工作臺(tái)或培養(yǎng)箱內(nèi)。

5)所有放入工作臺(tái)內(nèi)的試劑瓶或離心管均需過(guò)火三次：打開(kāi)瓶蓋前，打開(kāi)后，取液畢關(guān)上瓶蓋前均需在酒精燈火焰上過(guò)一下火。

6)任何取液過(guò)程均不能讓一次性滴管觸及瓶口，試劑瓶或離心管開(kāi)蓋后，瓶蓋應(yīng)側(cè)放。

細(xì)胞要養(yǎng)好，需要各位科研老師耐心，溫柔的呵護(hù)，建議使用品質(zhì)良好的細(xì)胞株和培養(yǎng)基，同時(shí)提前做好細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備工作，事半功倍。