常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法
常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來源,一般是來自實(shí)驗(yàn)服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
貨號：IM-H313 來源：ATCC
規(guī)格：1x106cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣，貼壁生長
培養(yǎng)基：DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+PS
傳代方法：1:2至1:3，每周 3次
價格：￥1200
產(chǎn)品規(guī)格：500ml
￥1080
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥500
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥98
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥68
在PEG脅迫下，將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合，構(gòu)建了人臍靜脈細(xì)胞株, EA.hy926。融合子在HAT培養(yǎng)基上生長并以八因子相關(guān)抗原篩選。EA.hy926已經(jīng)過100次以上的群體倍增(PDLs)。電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細(xì)胞質(zhì)分布以及組織特異性的細(xì)胞器，分化的內(nèi)皮細(xì)胞特性如血管生成，體內(nèi)平衡/血栓形成，血壓及炎癥反應(yīng)。
| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | EA.hy926人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞（STR鑒定報(bào)告） | |||
| 細(xì)胞別稱 | EA. hy 926; EA hy 926; EAhy 926; EAHY-926; EA.Hy926; EA.hy926; EAhy926; EaHy926; Eahy926 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 組織來源 | 臍靜脈/體細(xì)胞雜交 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| STR位點(diǎn) | Amelogenin：X；CSF1PO：10,11,12；D13S317：11；D16S539：11，12；D18S51：13,15,17；D19S433：13,14；D21S11：28,29,32；D2S1338：22,24；D3S1358：15,16；D5S818：11；D7S820：8,9,10；D8S1179：13；FGA：22,23；TH01：6,8,9.3；TPOX：8,9；vWA：14,17； | |||
| STR鑒定圖片 |  | |||
| 生物安全等級 | 1 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2922 | |||
| 培養(yǎng)基 | DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 倍增時間 | ~12-24小時 | |||
| 抗原表達(dá)情況 | Factor VIII-related antigen; Homo sapiens, expressed | |||
| 基因表達(dá)情況 | Factor VIII-related antigen; Homo sapiens. | |||
| 細(xì)胞貨期 | 2周左右 | |||
| 運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 到貨方式 | 復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?0X和20X物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 | |||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代方法 | 1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | |||
| 到貨方式 | 凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 | |||
| 培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | |||
| 復(fù)蘇操作 | 1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請售后時請?zhí)峁┘?xì)胞收貨時及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 5.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費(fèi)售后。 | |||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量凍存即可。 如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。 | |||
| 凍存方法 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
1986年始，迄今為止，關(guān)于EA.hy926人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞的文獻(xiàn)有1227篇。
在pubmed數(shù)據(jù)庫中用“EA.hy926”搜索該關(guān)鍵詞，第一篇為1986年B A van Oost在“Biochem Cell
Biol”上發(fā)表的“Isolation of a human von Willebrand factor cDNA from the hybrid
endothelial cell line EA.hy926”。
研究人員研究了多種化合物對EA.hy926細(xì)胞的抗氧化和抗炎作用，包括黃芪多糖、丹參素等。這些研究有助于了解這些化合物在保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免受氧化應(yīng)激和炎癥損傷中的作用。例如，黃芪多糖可以顯著減少氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞損傷，并通過提高抗氧化酶活性和降低炎癥因子的表達(dá)來發(fā)揮保護(hù)作用。
研究人員研究了EA.hy926細(xì)胞中的關(guān)鍵信號傳導(dǎo)通路，如AKT/mTOR通路，以及它們在細(xì)胞凋亡和自噬中的作用。這些研究有助于開發(fā)針對這些通路的靶向藥物，以改善血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。例如，研究發(fā)現(xiàn)抑制AKT/mTOR通路可以顯著抑制EA.hy926細(xì)胞的凋亡和自噬。
研究人員探索了EA.hy926細(xì)胞在抗血管生成方面的作用，包括使用EA.hy926細(xì)胞作為模型來研究抗血管生成藥物的療效。這些研究有助于開發(fā)新的治療方法來抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。例如，研究人員發(fā)現(xiàn)某些藥物可以通過抑制EA.hy926細(xì)胞的血管生成活性來抑制腫瘤的生長。
研究人員研究了高糖環(huán)境下EA.hy926細(xì)胞的代謝變化，以及這些變化對細(xì)胞功能的影響。這些研究有助于了解糖尿病等疾病對血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響，并為開發(fā)新的治療方法提供依據(jù)。例如，研究發(fā)現(xiàn)高糖環(huán)境可以顯著改變EA.hy926細(xì)胞的代謝途徑，導(dǎo)致細(xì)胞功能受損。
研究人員研究了氧化應(yīng)激對EA.hy926細(xì)胞的影響，以及抗氧化劑在減輕氧化應(yīng)激損傷中的作用。這些研究有助于了解氧化應(yīng)激在心血管疾病中的作用，并為開發(fā)抗氧化治療策略提供依據(jù)。例如，研究發(fā)現(xiàn)某些抗氧化劑可以通過減少氧化應(yīng)激損傷來保護(hù)EA.hy926細(xì)胞。
研究人員使用EA.hy926細(xì)胞作為模型來研究肝癌對血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響，以及肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。這些研究有助于了解肝癌的發(fā)病機(jī)制，并為開發(fā)新的治療方法提供依據(jù)。例如，研究發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞可以改變EA.hy926細(xì)胞的細(xì)胞骨架和細(xì)胞間連接，促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。
人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞(EA.hy926)的標(biāo)志物包括Cytokeratin、Fibronectin、Laminin、VEGF、PDGF、TGF-β、FRL-2、CD31、CD34和Thrombomodulin等。這些標(biāo)志物對于識別和研究EA.hy926臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞至關(guān)重要。
問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻(xiàn)里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？
答：部分細(xì)胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
問：凍存細(xì)胞運(yùn)輸與常溫細(xì)胞運(yùn)輸相比有什么區(qū)別？
答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈送了一管，實(shí)際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸，所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。
問：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？
答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。
問：運(yùn)輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?
答：不能回收使用的，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
問：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復(fù)蘇會有影響嗎？
答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。
問：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？
答：是的，同一個細(xì)胞系只有一個RRID。
細(xì)胞重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)
1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；
2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；
3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
5.細(xì)胞活性問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
6.視具體情況而定。
細(xì)胞不予重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)
1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；
5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；
6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)；
7.視具體情況而定。
常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來源,一般是來自實(shí)驗(yàn)服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
細(xì)胞聚團(tuán)的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細(xì)胞可能聚集的一些原因包括:1.過度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過度生長、5.污染等;如何避免聚團(tuán)細(xì)胞的生成;首先確認(rèn)當(dāng)前細(xì)胞生長密度及狀態(tài),80%左右的生長密度即可進(jìn)行傳代,此時細(xì)胞狀態(tài)較好,且用于傳代的數(shù)量也···
細(xì)胞有空泡原因分析及解決方法:出現(xiàn)細(xì)胞空泡情況有1.細(xì)胞老化2.培養(yǎng)液錯誤配制;3.細(xì)胞消化時操作不當(dāng);4.污染等等,如細(xì)胞老化,解決方法,原代細(xì)胞使用較低代次進(jìn)行實(shí)驗(yàn),傳代細(xì)胞避免傳代次數(shù)過高
細(xì)胞半換液和全換液操作步驟:第一種方式:細(xì)胞全換液;如果是貼壁細(xì)胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補(bǔ)充足量新鮮完全培養(yǎng)基;第二種方式:細(xì)胞半換液;"細(xì)胞半換液"又稱"細(xì)胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進(jìn)去,選它的原因其實(shí)與前面不加···
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
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