原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞（免疫熒光鑒定報(bào)告）

貨號(hào)：IMP-R273

規(guī)格：5x10⁵cells/T25或1mL凍存管

形態(tài)：圓形或橢圓形細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基：大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞專用培養(yǎng)基

培養(yǎng)環(huán)境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代比例：1:2至1:3，每周 2-3次

產(chǎn)品貨期：2周左右

價(jià)格：￥4750

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配套相關(guān)培養(yǎng)產(chǎn)品

背景介紹培養(yǎng)操作凍存步驟售后服務(wù)

背景簡(jiǎn)介

少突膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中膠質(zhì)細(xì)胞的重要組成部分，其主要功能是包繞神經(jīng)元的軸突形成髓鞘，協(xié)助神經(jīng)電型號(hào)的跳躍式高效傳遞，維持和保護(hù)神經(jīng)元的正常功能。此外，少突膠質(zhì)細(xì)胞還具有合成和分泌多種細(xì)胞因子來(lái)促進(jìn)神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育和存活等功能。

細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱	原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞（免疫熒光鑒定報(bào)告）
種屬來(lái)源	大鼠
組織來(lái)源	腦
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)	圓形或橢圓形細(xì)胞
細(xì)胞代數(shù)	10代以內(nèi)
細(xì)胞規(guī)格	5×10⁵cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)	無(wú)
培養(yǎng)基	原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞專用培養(yǎng)基
培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞傳代操作方法

到貨方式：復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸

收貨處理

1.收到原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請(qǐng)立即和我們聯(lián)系;如果沒有，請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。細(xì)胞密度小于80%時(shí)，請(qǐng)換液并讓細(xì)胞瓶處于透氣狀態(tài)(培養(yǎng)基不能回收使用)。

2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，(10×，20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。

原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞傳代操作步驟

傳代密度：原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。

2.因運(yùn)輸問題，部分原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

3申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

5. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異，對(duì)于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為，不予過度解釋或免費(fèi)售后。

原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟

到貨方式：凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸

收貨處理

1.干冰運(yùn)輸?shù)脑笫笊偻荒z質(zhì)細(xì)胞到貨，請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。

原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞復(fù)蘇方法

將含有1 mL原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻

在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。

然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞凍存操作方法

凍存液配方：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

凍存密度

如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞?/p>

如果沒要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。

原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞凍存操作步驟

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例

1.收集原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.根據(jù)細(xì)胞株數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x10^6~1x10^7/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

原代大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)

凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案,

原代細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

如何判斷原代細(xì)胞衰老了

1.形態(tài)學(xué)的觀察，細(xì)胞突起變大、或細(xì)胞扁平;2.β半乳糖苷染色判斷細(xì)胞是否衰老;3.增殖速率明顯下降;4.對(duì)相關(guān)的標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)。

如何確保分離的原代細(xì)胞的活性

1.組織離體時(shí)間不能太久;2.低溫冰上分離，但也不能直接從-80℃冰箱上取出一塊冰;3.無(wú)菌操作體系;4.消化酶的濃度和消化時(shí)間的把控。

原代細(xì)胞可以無(wú)限的增殖

與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞具有有限的擴(kuò)增能力。建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個(gè)增值困難的細(xì)胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)，因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞)可能隨著時(shí)間的推移，大量生長(zhǎng)從而成為主要細(xì)胞。

如何讓原代細(xì)胞一直保持增殖能力

原代細(xì)胞傳代有限，可以通過構(gòu)建永生化細(xì)胞株使其獲得無(wú)限增殖的能力，即轉(zhuǎn)變?yōu)橛郎?xì)胞系。

原代細(xì)胞一般第幾代做實(shí)驗(yàn)比較好

5代以內(nèi)，3代最好。有些細(xì)胞比如特殊，如神經(jīng)元、巨噬為終末分化細(xì)胞，增殖能力很弱，建議客戶收到細(xì)胞請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)后直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，不建議傳代進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)和凍存。

原代細(xì)胞可以凍存嗎？?jī)龃鎻?fù)蘇后活率差的原因是什么?

這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長(zhǎng)緩慢的上皮細(xì)胞，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等，可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)性能的改變。凍存后復(fù)蘇活率低需要考慮凍存前細(xì)胞活性，細(xì)胞量以及凍存體系，凍存體系是指用的含血清的凍存液，還是一步凍存液，不同凍存方法對(duì)應(yīng)的操作方法不同需要注意。

通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。

貼壁的原代細(xì)胞很難消化是怎么回事

細(xì)胞初代培養(yǎng)時(shí)在細(xì)胞皿上培養(yǎng)的時(shí)間過長(zhǎng)，解決方法可以將酶的濃度降低，37℃培養(yǎng)箱中延長(zhǎng)消化時(shí)間，或者分步消化。

原代上皮細(xì)胞傳代之后形態(tài)發(fā)生變化

上皮細(xì)胞，傳代容易變形，上皮細(xì)胞傳代后，不容易再次貼壁，這個(gè)時(shí)候可以使用代膜的培養(yǎng)瓶或者瓶子包被一下(基質(zhì)膠，鼠尾膠原，多聚賴氨酸等)都可以，上皮細(xì)胞，傳代非常有限，且生長(zhǎng)比較慢，一般建議盡快實(shí)驗(yàn)，不適合長(zhǎng)時(shí)間去大量擴(kuò)增培養(yǎng)。

因原代細(xì)胞體外傳代有限，傳代次數(shù)皆為大部分人使用后的平均數(shù)據(jù)，受操作手法，培養(yǎng)環(huán)境，培養(yǎng)條件等因素綜合影響，建議收到后，盡快完成實(shí)驗(yàn)，不建議反復(fù)凍存一直傳代擴(kuò)增。

提取原代細(xì)胞經(jīng)常發(fā)生污染可以怎樣改善

首先要確保細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)室是否存在細(xì)菌污染，如果存在問題，需要將實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行消毒，培養(yǎng)箱滅菌，檢查試劑耗材是否可用，第二個(gè)就是注意無(wú)菌操作，保證試劑、剪刀鑷子等無(wú)菌，第三是可以在培養(yǎng)液中加抗生素，雙抗、兩性霉素等。