Bend.3小鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞（種屬鑒定報(bào)告）

貨號(hào)：IM-M040 來(lái)源：ATCC

規(guī)格：1×10⁶cells/T25或1mL凍存管 

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基：90%DMEM+10%FBS+PS

傳代比例：1:2至1:3 每周3次

BEND.3細(xì)胞消化時(shí)間培養(yǎng)箱內(nèi)消化2~3分鐘，細(xì)胞密度較低時(shí)，細(xì)胞形態(tài)較大，部分細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)“太陽(yáng)花”樣形態(tài)，這是細(xì)胞增殖的一個(gè)過(guò)程，為正?，F(xiàn)象

小鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞BEND3細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

價(jià)格：￥1200

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細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基是否需要預(yù)熱

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基需要預(yù)熱?。預(yù)熱培養(yǎng)基可以減少環(huán)境的改變對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的影響，避免細(xì)胞因溫度變化而產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，從而保持細(xì)胞的健康狀態(tài)和生長(zhǎng)環(huán)境的一致性??？梢蕴崆鞍胄r(shí)左右，將培養(yǎng)基、PBS和胰酶在37°C下預(yù)熱，把所需耗材和其他物品放置于超凈工作臺(tái)中紫外照射滅菌。

血清使用前需不需要滅活

一般培養(yǎng)細(xì)胞所使用的血清不需要滅活，滅活會(huì)導(dǎo)致血清部分營(yíng)養(yǎng)損失、沉淀增多，滅活的優(yōu)勢(shì)(主要是滅活補(bǔ)體以免影響細(xì)胞生長(zhǎng))在實(shí)際培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)于促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)并沒(méi)有太大意義。部分細(xì)胞對(duì)于生長(zhǎng)條件敏感，可以嘗試滅活血清培養(yǎng)，但大部分細(xì)胞并不需要。

血清融化后有沉淀會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎

血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類(lèi)等經(jīng)凍融后析出，導(dǎo)致血清內(nèi)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，該現(xiàn)象與血清品質(zhì)無(wú)關(guān)，大部分品牌的血清都會(huì)有這種情況，不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)，只是培養(yǎng)時(shí)可能偶爾觀察到血清沉淀，注意區(qū)分血清沉淀和細(xì)胞污染即可。

細(xì)胞為何生長(zhǎng)不均勻

細(xì)胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒(méi)有搖勻，或者放入時(shí)搖勻，但在細(xì)胞貼壁前，又移動(dòng)了培養(yǎng)瓶，頻繁開(kāi)關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動(dòng)或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過(guò)少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)不均勻。

細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理

一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周?chē)膽腋〖?xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過(guò)細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán))。

細(xì)胞內(nèi)有空泡，是否是正?，F(xiàn)象

部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個(gè)是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳，可以通過(guò)調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時(shí)間等方法來(lái)調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，且單個(gè)細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細(xì)胞代次較高，細(xì)胞老化所致，需更換代次較早的細(xì)胞。

細(xì)胞傳兩代后開(kāi)始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系)；或者消化過(guò)度，對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響；或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細(xì)胞，傳代太??；或者生長(zhǎng)較快的細(xì)胞，傳代較密，細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長(zhǎng))。

如何區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞

顯微鏡下觀察：活細(xì)胞中間透亮，飽滿，有光澤，死細(xì)胞較暗。也可以通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色來(lái)計(jì)算細(xì)胞活力。

何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞

用無(wú)血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200～2000 個(gè)/毫升，在0.1 毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺(tái)盼蘭溶液。輕輕混勻，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞?；罴?xì)胞排斥臺(tái)盼蘭，因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞，注意計(jì)數(shù)需在加入臺(tái)盼藍(lán)10min內(nèi)完成。有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的，可直接用計(jì)數(shù)儀進(jìn)行

何時(shí)須更換培養(yǎng)基

視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，常規(guī)細(xì)胞2天更換培養(yǎng)基。

細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好

一般情況下細(xì)胞生長(zhǎng)至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長(zhǎng)都有一個(gè)要求不宜生長(zhǎng)過(guò)密(也就是常說(shuō)的長(zhǎng)老了)，但有接觸抑制的細(xì)胞，在匯合前就必須進(jìn)行傳代，這類(lèi)細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，否則會(huì)引起細(xì)胞分化。

貼壁細(xì)胞總有部分圓形還會(huì)有一些漂浮的是正常嗎

大部分貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)都會(huì)有一些圓形透亮的細(xì)胞存在，也會(huì)有一些圓形細(xì)胞脫落懸浮的情況存在，這種主要是一些新增殖的細(xì)胞或由于局部空間不足被擠出的細(xì)胞，只要細(xì)胞持續(xù)增殖，都會(huì)有一些圓形細(xì)胞或脫落漂浮細(xì)胞，不影響細(xì)胞整體增殖和實(shí)驗(yàn)，保持正常換液、傳代周期即可。細(xì)胞具體情況也可以參考細(xì)胞庫(kù)不同細(xì)胞照片比對(duì)，大部分貼壁細(xì)胞都會(huì)有圓形細(xì)胞、脫落細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)顆粒等情況。

細(xì)胞內(nèi)很亮小泡泡是什么東西

一部分情況下細(xì)胞內(nèi)小亮點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)黑色顆粒或者一些粘附在細(xì)胞表面的碎片，這種黑點(diǎn)會(huì)在調(diào)整顯微鏡焦距時(shí)呈小黑點(diǎn)或者小亮點(diǎn)，容易被誤認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)小泡，其實(shí)只是細(xì)胞內(nèi)部或表面一些物質(zhì)折光形成的光學(xué)現(xiàn)象。也有些是細(xì)胞內(nèi)部脂滴，例如3T3-L1細(xì)胞在部分培養(yǎng)條件下可以明顯看到內(nèi)部脂滴，染色后更加清晰。

部分細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)確實(shí)可能會(huì)有空泡，可以參考細(xì)胞庫(kù)照片比對(duì)。若細(xì)胞突然出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)空泡增多現(xiàn)象，通常是細(xì)胞受到壓力的表現(xiàn)，原因可能是培養(yǎng)基中缺乏谷氨酰胺、添加抗真菌劑、不適當(dāng)?shù)腃O2環(huán)境對(duì)培養(yǎng)基中碳酸氫鈉濃度影響或培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)消耗殆盡。

細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)小黑點(diǎn)、污染如何防范

可從以下幾個(gè)方面進(jìn)行判斷： 細(xì)胞小黑點(diǎn)如何判斷 1、運(yùn)動(dòng)性：很多會(huì)動(dòng)的小黑點(diǎn)，只是發(fā)生布朗運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞碎片。從運(yùn)動(dòng)性上比較，浮躁的細(xì)菌活躍的多。 2、培養(yǎng)基的渾濁度：如果在顯微鏡下無(wú)法辨認(rèn)，那就交給時(shí)間吧。細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)于細(xì)菌來(lái)說(shuō)是非常營(yíng)養(yǎng)的大餐。一旦發(fā)生污染，細(xì)菌就會(huì)大量繁殖。培養(yǎng)基PH值迅速下降，培養(yǎng)基變黃且會(huì)變渾濁。通常在12小時(shí)內(nèi)就可以發(fā)現(xiàn)，而在48小時(shí)內(nèi)就非常明顯。被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基變黃且渾濁、未被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基偏紅且澄清。 3、接種平板：將懷疑污染物接種在微生物培養(yǎng)平板中，觀察菌落形成情況。碎片?細(xì)菌?一目了然。

細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)與ATCC等官網(wǎng)照片有點(diǎn)區(qū)別正常嗎?

由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)環(huán)境、操作方法、培養(yǎng)基及血清品牌批次不同，細(xì)胞實(shí)際培養(yǎng)形態(tài)、狀態(tài)、生長(zhǎng)速度等培養(yǎng)特性均有可能發(fā)生改變，甚至顯微鏡拍攝效果對(duì)細(xì)胞形態(tài)判斷都會(huì)有有一定影響。因此細(xì)胞形態(tài)只能作為實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的參考項(xiàng)目，無(wú)法作為細(xì)胞狀態(tài)或者類(lèi)型的判斷依據(jù)。實(shí)際上，細(xì)胞在不同細(xì)胞庫(kù)培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)都可能存在一定差異。

科研細(xì)胞購(gòu)買(mǎi)常見(jiàn)問(wèn)題

問(wèn)：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻(xiàn)里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？

答：部分細(xì)胞是會(huì)出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來(lái)源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過(guò)程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

問(wèn)：凍存細(xì)胞運(yùn)輸與常溫細(xì)胞運(yùn)輸相比有什么區(qū)別？

答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫(kù)存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈(zèng)送了一管，實(shí)際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸，所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。

問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？

答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會(huì)導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過(guò)3次，其次需要注意無(wú)菌操作，避免污染。

問(wèn)：運(yùn)輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?

答：不能回收使用的，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營(yíng)養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請(qǐng)及時(shí)按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。

問(wèn)：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對(duì)復(fù)蘇會(huì)有影響嗎？

答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對(duì)性對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。

問(wèn)：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？

答：是的，同一個(gè)細(xì)胞系只有一個(gè)RRID。

科研細(xì)胞株售后規(guī)定

1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液，細(xì)胞未開(kāi)封，如出現(xiàn)污染狀況等，重發(fā)

2.細(xì)胞免費(fèi)售后期為一周，一周內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)異常及時(shí)拍照反饋。超出一周沒(méi)有任何反饋視為細(xì)胞培養(yǎng)正常，后期若出現(xiàn)培養(yǎng)問(wèn)題不再免費(fèi)重發(fā)

3.申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，若無(wú)清晰照片及相應(yīng)信息，不予免費(fèi)售后

4.售后僅針對(duì)由于細(xì)胞自身狀態(tài)問(wèn)題導(dǎo)致不可傳代的情況，若客戶收貨一周內(nèi)已經(jīng)傳代或轉(zhuǎn)移細(xì)胞多次，出現(xiàn)死亡或者污染時(shí)不予免費(fèi)售后

5.凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶未反饋并復(fù)蘇2管失敗，我方將不提供免費(fèi)售后服務(wù)。凍存細(xì)胞售后均發(fā)復(fù)蘇培養(yǎng)，若要重發(fā)凍存細(xì)胞，需補(bǔ)加200元干冰運(yùn)輸費(fèi)用

6.客戶自行凍存細(xì)胞一定要注意凍存后復(fù)蘇一管檢查凍存活性，避免凍存死亡導(dǎo)致絕種。我方不對(duì)客戶凍存細(xì)胞死亡負(fù)責(zé)，客戶凍存細(xì)胞死亡時(shí)不予免費(fèi)售后

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細(xì)胞培養(yǎng)操作視頻

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• 第二節(jié):凍存細(xì)胞收貨處理教程

• 第三節(jié):細(xì)胞復(fù)蘇教程

• 第四節(jié):貼壁細(xì)胞傳代步驟

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