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ATCC細(xì)胞培養(yǎng)
貨號(hào)：IM-H026 來(lái)源：ATCC
規(guī)格：1x106cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)
培養(yǎng)基：90%DMEM +10%FBS+1%PS
傳代比例：1:2至1:3，每周 2-3次
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞說(shuō)明書
價(jià)格：￥1200
產(chǎn)品規(guī)格：500ml
￥800
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥500
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥98
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥68
MDA-MB-231細(xì)胞是從一名51歲的白人女性乳腺癌患者的胸水中分離建立的。MDA-MB-231細(xì)胞表達(dá)EGF受體、TGF-α受體和WNT7B癌基因。MDA-MB-231細(xì)胞在裸鼠和ALS處理的BALB/c小鼠中，能形成低分化腺癌(Ⅲ級(jí))。
| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞（STR鑒定正確） | |||
| 細(xì)胞別稱 | MDA_MB_231; MDA-MB 231; MDA.MB.231; MDA MB 231; MDA MB231; MDA Mb231; MDA-MB231; MDAMB-231; MDAMB231; MDA-231; MDA-231P; MDA231; MDA231-BRE; MB231; MD Anderson-Metastatic Breast-231 | |||
| 種屬來(lái)源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 女；51歲 | |||
| 組織來(lái)源 | 乳腺腺癌，轉(zhuǎn)移性胸膜滲出液 | |||
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | |||
| 染色體 | 58~61，有巨核 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| STR位點(diǎn)信息 | Amelogenin：X；CSF1PO：12，13；D13S317：13；D16S539：12；D18S51：11，16；D19S433：11，14；D21S11：30，33.2；D2S1338：20，21；D3S1358：16；D5S818：12；D7S820：8，9；D8S1179：13；FGA：22，23；TH01：7，9.3；TPOX：8，9；vWA：15，18； | |||
| STR鑒定位點(diǎn)圖 |  | |||
| 生物安全等級(jí) | 1 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 支原體檢測(cè) | 無(wú) | |||
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-12532 ATCC; HTB-26 ATCC; CRM-HTB-26 BCRC; 60425 BCRJ; 0164 DSMZ; ACC-732 ECACC; 92020424 ； 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心 | |||
| 培養(yǎng)基 | 90% DMEM +10% FBS+1%PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 倍增時(shí)間 | ~32-42 hours | |||
| 致瘤性 | Yes, in ALS treated BALB/c mice, forms poorly differentiated adenocarcinoma (grade III).Yes, in nude mice, forms poorly differentiated adenocarcinoma (grade III). | |||
| 受體表達(dá)情況 | epidermal growth factor (EGF), expressed;transforming growth factor alpha (TGF alpha), expressed | |||
| 凍存條件 | 無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 | |||
| 特別說(shuō)明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主 | |||
MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)常見問(wèn)題 | ||||
MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞形態(tài)特征MDA-MB-231屬上皮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)大多為紡錘狀，小部分呈圓形，常用于乳腺疾病的發(fā)病機(jī)理及臨床應(yīng)用研究。
| ||||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 到貨方式 | 復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請(qǐng)立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 | |||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代方法 | 1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | |||
| 到貨方式 | 凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 | |||
| 培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | |||
| 復(fù)蘇操作 | 1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 5.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異，對(duì)于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為，不予過(guò)度解釋或免費(fèi)售后。 | |||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞? 如果沒要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。 | |||
| 凍存方法 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
CircRNA_0044556 diminishes the sensitivity of triple?negative breast cancer cells to adriamycin by sponging miR?145 and regulating NRAS. Mol Med Rep. 2022 Feb;25(2):51. doi: 10.3892/mmr.2021.12567. Epub 2021 Dec 16. PMID: 34913063; PMCID: PMC8711030.
作者：Chen J, Shi P, Zhang J, Li Y, Ma J, Zhang Y, Liu H.
細(xì)胞：ADM?resistant cell line MDA?MB?231/ADM (IMD?003)
2022年影響因子/JCR分區(qū)：3.423/Q3
1974年始，迄今為止，關(guān)于人乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231)的文獻(xiàn)已有19940篇。
在pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中用“mda-mb-231 cells”搜索該關(guān)鍵詞，第一篇為1974年R Cailleau在J Natl Cancer Inst.發(fā)表的“Breast tumor cell lines from pleural effusions”。
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231是一種上皮樣細(xì)胞，從患有腺癌的40歲白人女性的乳腺中分離出來(lái)。該細(xì)胞可用于試驗(yàn)開發(fā)。
學(xué)者經(jīng)常利用MDA-MB-231細(xì)胞進(jìn)行針對(duì)乳腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制研究，包含細(xì)胞黏附、細(xì)胞在體外培養(yǎng)中的擴(kuò)散、侵襲和血管生產(chǎn)成本等。
分子靶向治療是乳腺癌治療的一個(gè)重要領(lǐng)域，特別是在針對(duì)特定基因突變的治療策略方面。例如，學(xué)者利用MDA-MB-231細(xì)胞中研究常見的過(guò)表達(dá)蛋白，如HER2/ERBB2，進(jìn)而評(píng)估針對(duì)HER2/ERBB2的靶向藥物對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞系的作用，以確定其對(duì)乳腺癌的治療潛力。
通過(guò)使用CRISPR-Cas9等基因編輯技術(shù)，研究人員能夠精確地敲除或過(guò)表達(dá)MDA-MB-231細(xì)胞中的特定基因。有利于系統(tǒng)地研究這些基因在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展中的作用，從而揭示腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
使用MDA-MB-231細(xì)胞建立3D培養(yǎng)模型，能更真實(shí)地模擬腫瘤在體內(nèi)的生長(zhǎng)和行為，為研究提供了更為接近生理狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
在藥物篩選和開發(fā)方面，利用MDA-MB-231細(xì)胞系進(jìn)行高通量藥物篩選，能夠發(fā)現(xiàn)新的抗乳腺癌藥物，并開發(fā)針對(duì)該細(xì)胞系的治療方法，為乳腺癌的治療提供了新的可能性。
MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的標(biāo)志物包括ER、PR、HER2、MMP家族、Cyclin D1、p53、Bcl-2家族蛋白、CD44、CD24和ALDH等。這些標(biāo)志物用于識(shí)別、研究和治療乳腺癌細(xì)胞。
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基是否需要預(yù)熱
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基需要預(yù)熱?。預(yù)熱培養(yǎng)基可以減少環(huán)境的改變對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的影響，避免細(xì)胞因溫度變化而產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，從而保持細(xì)胞的健康狀態(tài)和生長(zhǎng)環(huán)境的一致性?。可以提前半小時(shí)左右，將培養(yǎng)基、PBS和胰酶在37°C下預(yù)熱，把所需耗材和其他物品放置于超凈工作臺(tái)中紫外照射滅菌。
血清使用前需不需要滅活
一般培養(yǎng)細(xì)胞所使用的血清不需要滅活，滅活會(huì)導(dǎo)致血清部分營(yíng)養(yǎng)損失、沉淀增多，滅活的優(yōu)勢(shì)(主要是滅活補(bǔ)體以免影響細(xì)胞生長(zhǎng))在實(shí)際培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)于促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)并沒有太大意義。部分細(xì)胞對(duì)于生長(zhǎng)條件敏感，可以嘗試滅活血清培養(yǎng)，但大部分細(xì)胞并不需要。
血清融化后有沉淀會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎
血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類等經(jīng)凍融后析出，導(dǎo)致血清內(nèi)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，該現(xiàn)象與血清品質(zhì)無(wú)關(guān)，大部分品牌的血清都會(huì)有這種情況，不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)，只是培養(yǎng)時(shí)可能偶爾觀察到血清沉淀，注意區(qū)分血清沉淀和細(xì)胞污染即可。
細(xì)胞為何生長(zhǎng)不均勻
細(xì)胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時(shí)搖勻，但在細(xì)胞貼壁前，又移動(dòng)了培養(yǎng)瓶，頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動(dòng)或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過(guò)少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)不均勻。
細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理
一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正常現(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細(xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過(guò)細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán))。
細(xì)胞內(nèi)有空泡，是否是正常現(xiàn)象
部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個(gè)是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳，可以通過(guò)調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時(shí)間等方法來(lái)調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，且單個(gè)細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細(xì)胞代次較高，細(xì)胞老化所致，需更換代次較早的細(xì)胞。
細(xì)胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因
很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系)；或者消化過(guò)度，對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響；或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細(xì)胞，傳代太稀；或者生長(zhǎng)較快的細(xì)胞，傳代較密，細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長(zhǎng))。
如何區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞
顯微鏡下觀察：活細(xì)胞中間透亮，飽滿，有光澤，死細(xì)胞較暗。也可以通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色來(lái)計(jì)算細(xì)胞活力。
何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞
用無(wú)血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200～2000 個(gè)/毫升，在0.1 毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺(tái)盼蘭溶液。輕輕混勻，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞?；罴?xì)胞排斥臺(tái)盼蘭，因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞，注意計(jì)數(shù)需在加入臺(tái)盼藍(lán)10min內(nèi)完成。有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的，可直接用計(jì)數(shù)儀進(jìn)行
何時(shí)須更換培養(yǎng)基
視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，常規(guī)細(xì)胞2天更換培養(yǎng)基。
細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好
一般情況下細(xì)胞生長(zhǎng)至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長(zhǎng)都有一個(gè)要求不宜生長(zhǎng)過(guò)密(也就是常說(shuō)的長(zhǎng)老了)，但有接觸抑制的細(xì)胞，在匯合前就必須進(jìn)行傳代，這類細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，否則會(huì)引起細(xì)胞分化。
貼壁細(xì)胞總有部分圓形還會(huì)有一些漂浮的是正常嗎
大部分貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)都會(huì)有一些圓形透亮的細(xì)胞存在，也會(huì)有一些圓形細(xì)胞脫落懸浮的情況存在，這種主要是一些新增殖的細(xì)胞或由于局部空間不足被擠出的細(xì)胞，只要細(xì)胞持續(xù)增殖，都會(huì)有一些圓形細(xì)胞或脫落漂浮細(xì)胞，不影響細(xì)胞整體增殖和實(shí)驗(yàn)，保持正常換液、傳代周期即可。細(xì)胞具體情況也可以參考細(xì)胞庫(kù)不同細(xì)胞照片比對(duì)，大部分貼壁細(xì)胞都會(huì)有圓形細(xì)胞、脫落細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)顆粒等情況。
細(xì)胞內(nèi)很亮小泡泡是什么東西
一部分情況下細(xì)胞內(nèi)小亮點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)黑色顆?；蛘咭恍┱掣皆诩?xì)胞表面的碎片，這種黑點(diǎn)會(huì)在調(diào)整顯微鏡焦距時(shí)呈小黑點(diǎn)或者小亮點(diǎn)，容易被誤認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)小泡，其實(shí)只是細(xì)胞內(nèi)部或表面一些物質(zhì)折光形成的光學(xué)現(xiàn)象。也有些是細(xì)胞內(nèi)部脂滴，例如3T3-L1細(xì)胞在部分培養(yǎng)條件下可以明顯看到內(nèi)部脂滴，染色后更加清晰。
部分細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)確實(shí)可能會(huì)有空泡，可以參考細(xì)胞庫(kù)照片比對(duì)。若細(xì)胞突然出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)空泡增多現(xiàn)象，通常是細(xì)胞受到壓力的表現(xiàn)，原因可能是培養(yǎng)基中缺乏谷氨酰胺、添加抗真菌劑、不適當(dāng)?shù)腃O2環(huán)境對(duì)培養(yǎng)基中碳酸氫鈉濃度影響或培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)消耗殆盡。
細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)小黑點(diǎn)、污染如何防范
可從以下幾個(gè)方面進(jìn)行判斷： 細(xì)胞小黑點(diǎn)如何判斷 1、運(yùn)動(dòng)性：很多會(huì)動(dòng)的小黑點(diǎn)，只是發(fā)生布朗運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞碎片。從運(yùn)動(dòng)性上比較，浮躁的細(xì)菌活躍的多。 2、培養(yǎng)基的渾濁度：如果在顯微鏡下無(wú)法辨認(rèn)，那就交給時(shí)間吧。細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)于細(xì)菌來(lái)說(shuō)是非常營(yíng)養(yǎng)的大餐。一旦發(fā)生污染，細(xì)菌就會(huì)大量繁殖。培養(yǎng)基PH值迅速下降，培養(yǎng)基變黃且會(huì)變渾濁。通常在12小時(shí)內(nèi)就可以發(fā)現(xiàn)，而在48小時(shí)內(nèi)就非常明顯。被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基變黃且渾濁、未被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基偏紅且澄清。 3、接種平板：將懷疑污染物接種在微生物培養(yǎng)平板中，觀察菌落形成情況。碎片?細(xì)菌?一目了然。
細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)與ATCC等官網(wǎng)照片有點(diǎn)區(qū)別正常嗎?
由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)環(huán)境、操作方法、培養(yǎng)基及血清品牌批次不同，細(xì)胞實(shí)際培養(yǎng)形態(tài)、狀態(tài)、生長(zhǎng)速度等培養(yǎng)特性均有可能發(fā)生改變，甚至顯微鏡拍攝效果對(duì)細(xì)胞形態(tài)判斷都會(huì)有有一定影響。因此細(xì)胞形態(tài)只能作為實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的參考項(xiàng)目，無(wú)法作為細(xì)胞狀態(tài)或者類型的判斷依據(jù)。實(shí)際上，細(xì)胞在不同細(xì)胞庫(kù)培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)都可能存在一定差異。
問(wèn)：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻(xiàn)里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？
答：部分細(xì)胞是會(huì)出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來(lái)源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過(guò)程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
問(wèn)：凍存細(xì)胞運(yùn)輸與常溫細(xì)胞運(yùn)輸相比有什么區(qū)別？
答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫(kù)存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈(zèng)送了一管，實(shí)際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸，所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。
問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？
答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會(huì)導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過(guò)3次，其次需要注意無(wú)菌操作，避免污染。
問(wèn)：運(yùn)輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?
答：不能回收使用的，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營(yíng)養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請(qǐng)及時(shí)按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
問(wèn)：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對(duì)復(fù)蘇會(huì)有影響嗎？
答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對(duì)性對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。
問(wèn)：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？
答：是的，同一個(gè)細(xì)胞系只有一個(gè)RRID。
1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液，細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況等，重發(fā)
2.細(xì)胞免費(fèi)售后期為一周，一周內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)異常及時(shí)拍照反饋。超出一周沒有任何反饋視為細(xì)胞培養(yǎng)正常，后期若出現(xiàn)培養(yǎng)問(wèn)題不再免費(fèi)重發(fā)
3.申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，若無(wú)清晰照片及相應(yīng)信息，不予免費(fèi)售后
4.售后僅針對(duì)由于細(xì)胞自身狀態(tài)問(wèn)題導(dǎo)致不可傳代的情況，若客戶收貨一周內(nèi)已經(jīng)傳代或轉(zhuǎn)移細(xì)胞多次，出現(xiàn)死亡或者污染時(shí)不予免費(fèi)售后
5.凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶未反饋并復(fù)蘇2管失敗，我方將不提供免費(fèi)售后服務(wù)。凍存細(xì)胞售后均發(fā)復(fù)蘇培養(yǎng)，若要重發(fā)凍存細(xì)胞，需補(bǔ)加200元干冰運(yùn)輸費(fèi)用
6.客戶自行凍存細(xì)胞一定要注意凍存后復(fù)蘇一管檢查凍存活性，避免凍存死亡導(dǎo)致絕種。我方不對(duì)客戶凍存細(xì)胞死亡負(fù)責(zé)，客戶凍存細(xì)胞死亡時(shí)不予免費(fèi)售后
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