產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Dispase II，中文名分散酶II，一種非特異性金屬蛋白酶，細(xì)胞生物學(xué)中常用于從不同的組織或器官分離單細(xì)胞，并用于后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)，如原代細(xì)胞的分離，細(xì)胞傳代等。另外，Dispase II還可用于消除懸浮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生的細(xì)胞聚集。與其他細(xì)胞生物學(xué)常用蛋白酶(如胰蛋白酶、膠原酶、鏈霉蛋白酶等)相比，該酶具有以下優(yōu)勢(shì)：1)一種快速有效且溫和的細(xì)胞消化酶，對(duì)細(xì)胞損傷小，且能維持細(xì)胞膜完整性;2)來(lái)源于細(xì)菌，無(wú)支原體或其他動(dòng)物病毒污染;3)穩(wěn)定性強(qiáng)，不受溫度、pH及血清組分的影響;4)可用于多種類(lèi)型組織和細(xì)胞的分離等。

本品非無(wú)菌Dispase II，來(lái)源于Bacillus polymyxa，使用時(shí)需對(duì)其除菌處理，用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。

產(chǎn)品信息

酶活力單位定義

在37℃，pH7.5 的條件下，每分鐘水解酪蛋白釋放出相當(dāng)于1 μM(181 μg)酪氨酸的福林陽(yáng)性氨基酸和肽所需要的酶量，即為一個(gè)蛋白酶活性單位，以U表示。

Dispase II 分散酶II使用說(shuō)明

1.Dispase II儲(chǔ)存液的配制

(1)用Hepe緩沖鹽溶液(50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl)溶解適量本品凍干粉，配制成10 mg/mL的儲(chǔ)存液，用0.22 μM濾膜過(guò)濾除菌。

(2)使用時(shí)用適當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)液將上述儲(chǔ)存液稀釋到工作液濃度即可，用于細(xì)胞分離時(shí)其常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。

注：不推薦使用高于2.4 U/mL的工作濃度。

2.組織的解離

(1)用無(wú)菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊;

(2)用無(wú)菌PBS清洗組織塊;

(3)向上述組織塊中加入Dispase II溶液(工作濃度為0.6-2.4 U/mL)，并確保組織塊全部浸沒(méi)于Dispase 溶液中。

(4)37℃孵育，孵育過(guò)程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。注：若第一次使用該酶，可通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定需要的總孵育時(shí)間。一般對(duì)于較難解離組織，1h即可達(dá)到分離目的，但更長(zhǎng)時(shí)間(如數(shù)小時(shí))的孵育也不會(huì)明顯影響細(xì)胞活性。

(5)如有需要，可將上述消化產(chǎn)物通過(guò)無(wú)菌不銹鋼網(wǎng)篩過(guò)濾，以分開(kāi)單細(xì)胞與殘留的組織塊。或者待大塊組織沉淀后輕輕倒出上層細(xì)胞，若是需要，換用新鮮dispase溶液以進(jìn)一步解離殘留組織。

(6)離心沉淀細(xì)胞，倒掉酶溶液;

(7)用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細(xì)胞。

3. 細(xì)胞傳代

(1)利用Dispase 溶液(37℃預(yù)熱)浸沒(méi)細(xì)胞，于37℃孵育5 min;

(2)吸除上述溶液，繼續(xù)于37℃孵育10 min;

(3)顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞分離情況，如需要，可進(jìn)一步孵育15 min;

(4)利用細(xì)胞培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，輕輕旋轉(zhuǎn)使得細(xì)胞沉淀并用培養(yǎng)基清洗細(xì)胞;

(5)換用新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，并按常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞鋪板。

Dispase II 分散酶II注意事項(xiàng)

1.儲(chǔ)存液于4℃可穩(wěn)定保存2周，若長(zhǎng)期保存，請(qǐng)分裝后于-20℃凍存，2個(gè)月有效。避免反復(fù)凍融。

2.本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

3.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。