產(chǎn)品簡介

D-熒光素(D-Luciferin) 是熒光素酶(Luciferase) 的常用底物，普遍應用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域， 特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機制是在 ATP 和熒光素酶的作用下， 熒光素(底物)能夠被氧化發(fā)光。當熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見下圖) 。將攜帶熒光素腳編碼基因( Luc ) 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細胞后，導入研究動物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)( BL )來檢測光強度變化，從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展狀態(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用 ATP 對此反應體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。

D-熒光素也常用于體外研究， 包括熒光素酶和 ATP 水平分析; 報告基因分析; 高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素(游離酸)，D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度 NaOH 和 KOH 溶液?？扇苡诩状己?DMSO; 后者能夠易溶于水或緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實驗。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應用上都沒有實質(zhì)性的差別。

產(chǎn)品信息

D-熒光素鉀鹽使用說明

1.體外生物發(fā)光檢測

(1).用無菌蒸餾水溶解 D-熒光素鉀鹽，配制成 30mg/mL 的儲存液(100-200×)，混勻。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復凍融。

(2).用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至 0.15-0.3mg/mL 的工作液濃度。

(3).去除細胞培養(yǎng)基。

(4).待圖像分析前， 向細胞內(nèi)添加熒光素工作液， 37℃孵育 5-10min， 然后進行圖像分析。

2.活體成像分析

(1).用無菌的 D PBS(w/oMg、Ca2+) 配制 15mg/mL 的熒光素的儲存液， 混勻。

(2).用 0.2um 濾膜過濾除菌。立即使用，或分裝于-20℃避光保存，避免反復凍融。

(3).腹腔注射(i.p.)，按照 150mg/kg 的熒光素/體重濃度進行注射。

(4).注射入體內(nèi) 10-15min(待光信號達到最強穩(wěn)定平臺期) 后進行成像分析。

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定最高信號檢測時間和信號平臺期。

D-熒光素鉀鹽注意事項

1.本品(firefly luciferin) 和甲蟲熒光素(beetle luciferin) 僅僅是不同公司在命名上的差異， 都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazo line-4-carboxylic acid。

2.注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線，確定最佳信號平臺期和最佳的檢測時間。

3.如果要進行 ATP 的檢測，盡量避免外源 ATP 的污染，如操作時戴手套并使用 ATP-free 的實驗耗材，在進行熒光素的溶解時應使用 ATP-free 無菌水。

4.本品要進行避光操作和保存。儲存液過濾除菌后可分裝于-20℃或-80℃凍存。如果有條件，可對儲存液充入氮氣或氬氣(防止氧化)，穩(wěn)定性和保存時間長達 1 年。

5.在進行 D-熒光素鉀鹽的溶解時，應使用無鈣鎂離子的 DPBS，因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性，此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響，從而影響檢測。

6.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

7.本產(chǎn)品僅作科研用途。