產(chǎn)品描述

運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元(MN)維持培養(yǎng)基是一種適用于人類運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元(Human motor neuron, hMN)，無血清，無動(dòng)物源成分的完全培養(yǎng)基，hMN 在本培養(yǎng)基中可以持續(xù)存活并成熟為表達(dá)CHAT的成熟MN，適用于體外研究。

產(chǎn)品信息

表1. MN維持培養(yǎng)基組成信息

注：括號(hào)內(nèi)容如50×為母液濃度，使用時(shí)終濃度需為1×。例如MN維持培養(yǎng)基補(bǔ)充劑(50×)需添加進(jìn)MN維持基礎(chǔ)培養(yǎng)基使其稀釋50倍，使得補(bǔ)充劑終濃度為1×，配成MN維持培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)試劑與材料

表2. 推薦試劑&材料

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法(以6孔板1個(gè)孔為例)

一、完全培養(yǎng)基配制

(1) 在 4℃解凍MN維持培養(yǎng)基補(bǔ)充劑(50×)，不要在 37℃條件下解凍。

(2) 在生物安全柜中，按照實(shí)驗(yàn)用量，例如若用量為50 mL，配制方法為49 mL MN維持基礎(chǔ)培養(yǎng)基+1mL MN維持培養(yǎng)基補(bǔ)充劑(50×)配成MN維持培養(yǎng)基。

(3) 分化培養(yǎng)基建議現(xiàn)配現(xiàn)用，置于 4℃儲(chǔ)存，2 周內(nèi)使用。

注：補(bǔ)充劑可根據(jù)使用量進(jìn)行分裝以避免反復(fù)凍融。

二、MN復(fù)蘇

(1) 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)混合均勻。在300g條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)后吹勻。

(2) 將所有細(xì)胞懸液加入含適量MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)的基質(zhì)膠或laminin 521包被的六孔板(1孔)中培養(yǎng)過夜。

(3) 24h后，換成不含IMC-014-Y的MN維持培養(yǎng)基(MN貼壁不牢固，換液動(dòng)作需輕緩)，視培養(yǎng)基顏色或隔2天換液。

三、細(xì)胞傳代(當(dāng)有實(shí)驗(yàn)需求時(shí)可按培養(yǎng)器皿底面積1:1比例接種傳代)

(1) 棄去培養(yǎng)基，加入1-2 mL Accutase(含10μM IMC-014-Y)，置于37℃培養(yǎng)箱消化2-5min。

(2) 2-5 min后每孔加入等量 MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)，輕輕吹打細(xì)胞，使細(xì)胞解離成單細(xì)胞。

(3) 將細(xì)胞懸液收集到15 mL離心管中，室溫下300 g離心3 min。

(4) 仔細(xì)抽吸上清液，不干擾細(xì)胞，用1mL恢復(fù)室溫的MN維持培養(yǎng)基重懸細(xì)胞(含10μM IMC-014-Y)，輕輕地上下移液以確保細(xì)胞溶液均勻。

(5) 使用MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)稀釋細(xì)胞，將細(xì)胞以1:1比例接種到基質(zhì)膠或laminin 521包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培養(yǎng)過夜(按底面積算，1個(gè)T25相當(dāng)于六孔板2.5個(gè)孔，六孔板1孔可傳12孔板的2孔，24孔板的4孔，96孔板的6孔)。24h后，換成不含IMC-014-Y的MN維持培養(yǎng)基(MN貼壁不牢固，換液動(dòng)作需輕緩)，視培養(yǎng)基顏色或隔2天換液。

注：①M(fèi)N不能擴(kuò)增，盡量減少傳代。