背景簡介

肺動脈是由內膜、中層彈力層和外膜構成，三層緊密貼合在一起。其中，外膜是專門的支持組織，外膜成纖維是外膜的主要成分，在血管炎癥反應、血管重塑等方面發(fā)揮重要作用。

細胞產品信息

原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞培養(yǎng)操作步驟

原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞傳代操作方法

到貨方式：復蘇細胞/T25瓶運輸

收貨處理

1.收到原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現象。如果有，請立即和我們聯系;如果沒有，請您用75%酒精消毒細胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。細胞密度小于80%時，請換液并讓細胞瓶處于透氣狀態(tài)(培養(yǎng)基不能回收使用)。

2.靜置后觀察細胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行，能準確判斷原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，(10×，20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據。拍照反饋給我們。

原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞傳代操作步驟

傳代密度：原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞培養(yǎng)注意事項

1.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

2.因運輸問題，部分原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F象。請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

3申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

5. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。

原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞復蘇操作步驟

到貨方式：凍存細胞/1ml凍存管運輸

收貨處理

1.干冰運輸的原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞到貨，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。

2.為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞，如若不能復蘇請立即轉入液氮凍存。

原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞復蘇方法

將含有1 mL原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻

在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。

然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞凍存操作方法

凍存液配方：無血清凍存液，液氮儲存

凍存密度

如果是有要求每管要凍多少細胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數，剩下的細胞按計數需要的細胞量凍存即可。

如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。

原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞凍存操作步驟

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例

1.收集原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數。

2.根據細胞株數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x10^6~1x10^7/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

原代大鼠肺動脈外膜成纖維細胞凍存注意事項

凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案,